生物·选修1：生物技术实践
某科研小组欲探究固定化果胶酶对黑莓出汁率的影响及水解温度对固定化果胶酶活性的影响，进行了一系列实验，实验结果如下图所示。请回答下列问题：

（1）固定化果胶酶常用化学结合法和__________法，而不宜用包埋法，理由是______________。
（2）与实验组相比，对照组的不同处理是____________________；实验过程中，黑莓浆与固定化黑胶酶混合后需要振荡试管，目的是______________________________
（3）根据实验结果不能得出固定化果胶酶的最适温度是55℃的结论，理由是____________________；同一温度条件下，60℃时加入固定化果胶酶，黑莓的出汁率__________（填“有”或“没有”）提高，判断的依据是_________________________
（4）酶制剂不宜在最适温度下长期保存，宜在____________________条件下保存。

Ⅰ.图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示质粒，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示目的基因及限制酶切点。请回答下列问题：

（1）图1中限制酶EcoRⅠ的特点是_____。
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是_____。
A．解旋酶作用于①处，DNA连接酶作用于②处
B．③和④相间排列，构成了DNA分子的基本骨架
C．③代表磷酸，④代表脱氧核苷酸
D．用该片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有4³种
（3）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是_____。
（4）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含_____基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。
Ⅱ.酶工程包括酶的生产、酶的分离纯化、酶的固定化和酶的应用。
（5）生产提纯分泌型脂肪酶工程中，加入硫酸铵使酶与其他杂质分离，该过程属于酶分离提纯步骤中的_____。
A．过滤酶 B．干燥酶 C．层析酶 D．沉淀酶
（6）因固化条件不同，会造成固化酶的活力（注：酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量）受到使用次数的影响，由图5信息，你对该固化酶的使用，给予指导性的意见是_____。

人类最早进行的生物工程技术和生物工程的核心技术分别是：
①基因工程 ②细胞工程 ③发酵工程 ④酶工程

A．②①

B．③①

C．③②

D．④①

蓝莓富含花青素，对人体有增强视力、消除眼睛疲劳、消脂减肥、解酒护肝等功效。利用蓝莓可生产蓝莓果汁、蓝莓酒、蓝莓醋、蓝莓果酱等。下列叙述正确的是

A．蓝莓酒发酵过程中应严格控制无菌条件，并定时通入无菌空气

B．在制作蓝莓醋时，高压蒸汽灭菌后的果酒需冷却后才能接种醋杆菌

C．在制作蓝莓果汁时，果胶酶可破坏蓝莓细胞壁提高果汁产量

D．制作蓝莓酒和蓝莓醋时所需控制的最适温度相同

嗜热链球菌属于一种乳酸菌。分离出优质的嗜热链球菌是酸奶工业中的关键环节，以下是嗜热链球菌的有关分离纯化与鉴定过程，请回答相关问题。
第一步：从国家乳业技术中心获得混合发酵剂（含多种乳酸菌），用无菌生理盐水梯度稀释。
第二步：取等量不同稀释度的菌液分别接种于Elliker培养基，在相同且适宜条件下培养。
第三步：选取疑似菌落分别穿刺接种于ABC三种糖发酵半固体培养基（成分及现象如下表）中培养，进一步进行生化鉴定。

成分（g）	胰蛋白胨	牛肉膏	葡萄糖	蔗糖	麦芽糖	溴甲酚紫	NaCl	琼脂	现象
A培养基	10	3.0	5.0	无	无	0.04	5.0	5.0	紫色变为黄色
B培养基			无	5.0	无				紫色变为黄色
C培养基			无	无	5.0				不变色
说明	1.溴甲酚紫是一种酸碱指示剂，在中性时为紫色，碱性时为深红色，而在酸性时呈现黄色。 2.将上述成分溶解，pH调为7，用蒸馏水定容至1000mL；

 
第四步：将生化鉴定为嗜热链球菌的疑似菌落进行扩大培养并保存。
（1）第一步中稀释的目的是______________________。
（2）在第二步中，利用的接种方法是____________，可根据菌落__________特征来选取疑似菌落。（写出两点）
（3）第三步中，如果接种的疑似菌落确实是嗜热链球菌，根据生化鉴定现象归纳其代谢特点为：利用___（葡萄糖/蔗糖/麦芽糖）作为主要碳源，并可以经_____（无氧/有氧）呼吸的方式分解底物，且在代谢产物中一定有____（酸/碱/中）性产物产生。NaCl的主要作用是_________。
（4）第四步中，如果要长期保存分离出的菌种常采用___________________的方法，并将其置于_____ ℃ 冷冻箱中保存。

以下是柿子醋制作的流程:柿果→挑选→清洗→去皮→去核→脱涩处理→切块→压榨→柿汁→灭菌→酒精发酵→醋酸发酵→灭菌→陈酿→淋醋→过滤→成品请回答下列问题：
（1）脱涩过程可以用成熟的苹果、梨等水果释放的_________气体促进柿子成熟。
（2）将压榨后的柿汁加热到80℃保持10〜20分钟的目的是_______。酒精发酵时可添加活性干酵母进行，发酵的原理是____________(写反应式）。
（3）若醋酸发酵时需扩大培养醋酸菌种，实验室常用的接种方法是_________和___________；接种前应对培养皿、接种环和培养基进行灭菌，方法分别是________________；接种后培养时需要设置空白培养基，目的是______________。

筛选是生物工程中常用的技术手段，下列有关叙述错误的是

A．利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌

B．植物体细胞杂交过程中，原生质体融合后获得的细胞需进行筛选

C．在尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂筛选鉴定尿素分解菌

D．单克隆抗体制备过程中，第一次用选择性培养基筛选出的细胞产生特定抗体

下表是筛选异养型细菌的培养基配方。

(1)苯胺是致癌物质，土壤中有分解苯胺的异养型细菌，此培养基中的成分X除为目的菌提供能源外，还能提供________，该培养基从作用看属于________培养基。制备固体培养基时调节pH在________步骤后。
(2)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，则获得图B效果的接种方法是________。运用图A所示接种方法统计的菌落常常比活菌的实际数目________。在探究“酵母菌种群数量变化”实验中，已知每个计数室由25×16个小格组成，容纳液体的总体积为0.4 mm³，观察到图中计数室所示a、b、c、d、e 5个中格共有酵母菌80个，则1 mL样液中约有酵母菌________个。

(3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加________可初步鉴定该种细菌能够分解尿素，原理用方程式表示为________________________；在筛选能够分解纤维素的微生物过程中，常用到________染色法。在培养基灭菌后倒平板前以________比例加入染液，这种鉴定方法的的不足是__________________。
(4)培养基通常用__________法灭菌，若无条件，也可用间隙灭菌法。其程序是：第一天，将培养基在100 ℃下维持30 min，然后在36～37 ℃下放置24 h；之后重复前面的操作2-3次。请分析：
①培养基在100 ℃下维持30 min的目的是______。
②在36～37 ℃下放置24 h后再加热的目的是__________。
③怎样证明间隙灭菌法的效果？ ________。

某家庭拟自制酵母菌菌种酿制葡萄酒，请帮助完成酿制计划，并分析相关问题：

(1)制菌种步骤1：挑选白色斑点较多的葡萄，取皮加入培养液中，获得提取液。
①葡萄上的白色斑点很可能是__________________________________。
步骤2：菌种纯化 
②图乙所示的菌种纯化方法是______________。
步骤3：将菌种用培养液扩大培养。
③若要对培养液中的酵母菌计数可采用血球计数板操作，方法是：先将_____放在计数室上，用吸管吸取稀释后的培养液滴于其边缘，让培养液自行渗入，在显微镜下计数；也可采用图甲所示的方法____________。在相同条件下，采用上述两种方法对同一培养液进行计数时，在操作和计算均正确的前提下，发现前者计数结果明显偏大，可能的原因是________。
(2)挑选葡萄冲洗并晾干。
(3)破碎装瓶：不要将瓶装满，要留1/3的空间。
(4)接种并加糖发酵：所加糖量不要太多，可按照10∶1的比例加糖。若所加糖量过多，可能会导致_________________________。
(5)过滤：约一星期后将发酵液用尼龙布反复过滤，充分去除渣滓。
(6)密封：后期发酵。

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒感染引起的猪的一种烈性传染病，各个年龄段的猪均易感，发病率和死亡率可高达100%。出现疫情后，控制传染源的有效措施是

A．给健康猪注射预防疫苗	B．宰杀病猪并彻底消毒
C．对病猪进行隔离	D．将猪饲料高温煮沸