肠出血性大肠杆菌是能导致人体患病的为数不多的几种大肠杆菌中的一种，人体感染该种大肠杆菌后的主要症状是出血性腹泻，感染严重者可出现溶血性尿毒综合征( HUS)，危及生命。该大肠杆菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，从而形成透明圈。下图为从被肠出血性大肠杆菌污染的食物中分离和提纯该大肠杆菌的操作流程示意图。请回答下列相关问题：

（1）肉汤培养基可为培养的微生物提供的营养成分包括____。
（2）以上操作中在血平板上的接种方法是________；第一次接种操作前和整个接种操作结束后均需要对接种工具进行灼烧灭菌，其目的分别是___和____。
（3）为了进一步研究该大肠杆菌的抗原性，常利用___法分离其蛋白质，若甲蛋白质比乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是____。在装填凝胶柱时，不得有气泡产生，是因为________________

研究发现柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白质)均有抑菌作用，两者的提取及应用如下图所示。

(1) 柚皮易焦煳，宜采用________法提取柚皮精油，新鲜的柚皮干燥去水并用________浸泡处理，该过程得到的糊状液体可通过________除去其中的固体杂质。
(2) 培养基中的尿素和牛肉膏可为乳酸菌A生长提供________。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其相对分子质量越大，电泳速度________。
(3) 做抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

(4) 柚皮油也可以用萃取法来提取，原因是__________________，分析上图，提高萃取效果的方法是__________________、__________________。

鸭梨醋饮属于绿色健康饮品，既保存了鸭梨中的多种氨基酸、维生素、矿物质、有机酸等营养成分又兼具果醋醒酒护肝、助消化、降低血脂、软化血管等养生保健功能，深受广大消费者青睐。如图为鸭梨醋饮的制作流程图，请据图回答问题：

（1）若得到的鸭梨汁非常浑浊，解决的方法是__________。
（2）过程①所用的微生物是__________，为了提高该微生物的利用率，最好用__________法对其进行固定，而固定化酶一般不采用此法，理由是__________。
（3）过程②所用的微生物是__________，其为__________(填“需氧型”或“厌氧型”)生物，此过程发酵温度需要控制在__________。
（4）为获得高纯度的果酒，需要对过程①所用的微生物进行分离和纯化，其过程为：
第一步：配制培养基。该培养基必须含有微生物生长所需要的__________等基本营养成分，原料称重溶解后，需进行__________，然后进行灭菌操作，常用的灭菌方法是__________。
第二步：接种。微生物常用的接种方法有__________。
第三步：培养。温度控制在__________。
第四步：挑选符合要求的菌落。

请回答下列问题。
（1）从微生物所能利用的氮源种类来看，一部分微生物是不需要利用氨基酸作为氮源的，它们能把_____（列举两例）等简单氮源用于合成所需要的一切氨基酸，因而可称为“氨基酸自养型生物” 。
（2）伊红美蓝培养基可用于饮用水大肠杆菌数目的测定，根据培养基上黑色菌落的数目推测大肠菌的数量。但单位体积饮用水中大肠杆菌数量相对较少，若直接将一定体积的自来水接种到培养基中，培养后可能无法得到菌落或菌落数目太少，可通过“滤膜法”解决这个问题，其操作思路是：_____。稀释涂布平板法和______________________法是测定微生物数量更常用的两种方法。
（3）在固定化细胞实验中，明胶、琼脂糖、海藻酸钠等物质能作为包埋细胞载体的原因是______。在工业生产中，细胞的固定化是在严格_____条件下进行的。
（4）为探究一种新型碱性纤维素酶去污效能，研究小组进行了不同类型洗衣粉实验，结果如下图。加酶洗衣粉中目前常用的四类酶制剂除纤维素酶外，还有_____（至少答两类）。根据以上实验结果，_____________（能/否）得出对污布类型 2 的去污力最强是因碱性纤维素酶所致，并说明原因_________。

尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用。分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解。某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
1.4g	2.1g	0.2g	1.0g	10.0g	1.0g	15.0g

 
（1）根据培养基的成分判断，该同学_________（填“能”或“不能”）分离出土壤中分解尿素的细菌，原因是________________________________________。
（2）接种前要对培养基进行___________。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在_______条件下进行。
（3）一位同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是_________________，应当怎样操作才可以避免此种现象？______________________________________。
（4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将其接种在___________培养基上，等长成菌落后放在4 ℃的冰箱中保存。若要长期保存，可以采用___________的方法。

某校生物研究性学习小组的同学欲调查某冷饮店的冰块中大肠杆菌的含量。具体实验步骤如下:
第一步:配置培养基（成分：蛋白胨、氯化钠、乳糖、水、X和琼脂）；
第二步:制作无菌平板；
第三步:设置空白对照组和实验组，对照组接种①，实验组接种②。
第四步:将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。
回答下列问题:
（1）培养基中的乳糖可以为大肠杆菌提供________。为了方便大肠杆菌的鉴定，需要在培养基中添加成分X _______________，在该培养基表面，大肠杆菌的菌落呈现 ______（填颜色）。
（2）完善步骤三，①是__________________________ ，②是 ______________________________________ 。
（3）若该小组在空白对照组的平板上检测到少许菌落，请分析可能的原因:_________________________________________________________ 。
（4）将1mL冰块水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数为 ___________________ 。

原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃。土壤中有些细菌可以以原油中的多环芳烃为碳源,在培养基中形成分解圈。为筛选出能高效降解原油的菌种,某小组同学设计了相关实验。下列有关叙述不正确的是

A．应配制被原油污染土壤的土壤稀释液备用	B．配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基
C．将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上	D．在选择培养基上能形成分解圈的为所需菌种

植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：
（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将____________分解成____________。
（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成____________色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的____________。
（3）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、____________四类，为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：

	酵母膏	无机盐	淀粉	纤维素粉	琼脂	CR溶液	水
培养基甲	+	+	+	+	-	+	+
培养基乙	+	+	+	-	+	+	+

 
注：“+”表示有，“-”表示无。
据表判断，培养基甲__________填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是__________；培养基乙__________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是____________。
（4）纯化菌株时，通常使用的划线工具是____________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有____________。

为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。

（1）配制好的培养基灭菌通常可以使用_________法。步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是_______________________________。
（2）同学甲进行过程④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是___________；推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是________________；在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是____________________。
（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了过程④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为________________。
（4）步骤⑤需要震荡培养其目的是提高培养液溶氧量，同时使__________，提高营养物质利用率。
（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是____________________。

大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。
回答下列问题：
(1)利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmOl/L的________到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是______________蛋白质。
(2)通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤 膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。
①伊红-美蓝培养基属于_____(填“选择”或“鉴别”)培养基，蛋白胨的作用有_____(答出两点即可）。
②培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测方法是______。
③用滤膜法进行测定时，滤膜的孔径应 _______(填“大于”或“小于”）大肠杆菌。滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是___。