关于基因工程的叙述，正确的是

A．基因工程获得的新品种可以直接投放到环境中不会影响生态环境

B．细菌质粒是基因工程常用的运载体

C．通常用一种限制酶处理含目的基因的DNA，用另一种处理运载体DNA

D．为养成抗除草剂的农作物新品种导入的抗除草剂的基因只能以受精卵为载体

al一抗胰蛋白酶缺乏症是一种在北美较为常见的单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。对于该病患者常采用注射入al—抗胰蛋白酶来缓解症状。图1表示获取al—抗胰蛋白酶基因的两种方法，请回答下列问题：

(1)a过程是在__________酶的作用下完成的，该酶能够识别____________的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
(2)怎样从基因文库中得到所需的目的基因呢？简单地说就是根据___________,如基因在染色体上的位置、基因的功能等特性来获取。
(3)为了获得更多的目的基因，可用PCR技术扩增目的基因。PCR技术是一项在__________复制特定DNA片段的核酸合成技术。
(4)图2为矿区废弃地的生态恢复工程流程图，图2中的CD②分别为_________、___________,建立该生态统所要遵循的主要原理有___________________(写出1个即可)。
(5)图2中种植了抗逆性的植物，对于转基因生物人们存在安全方面的顾虑,按照对人类其中安全等动植物微生物和生态环境的危害程度，将农业转基因生物分为四个等级，其中安全等级级Ⅰ是指_______________(填“尚不存在”“具有低度”“具有高度”)危险。

图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由_________________________连接。
（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为_______________________
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有_____种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过_____________技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_____________。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般需要用添加____________的培养基进行培养，用影印法接种到只含________________的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。
（5）假设用BamH Ⅰ切割DNA获取目的基因，用Mbo Ⅰ切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BamH Ⅰ？为什么？___

科研人员利用大肠杆菌构建了抗虫基因文库。最新研究发现漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有显著的杀虫效果，现以p-B质粒为载体，构建AH基因的cDNA文库。图1表示p-B质粒，其中Cm!r表示氯霉素抗性基因，ccdB 基因表达产物能抑制大肠杆菌DNA复制。图中箭头表示相关限制酶的酶切位点，且不同种限制酶识别序列不同，其中Aiu I、Xba I、Ssp I和Mfe I识别的碱基序列和酶切位点分别是AGLCT、T4CTAGA、AATIATT、 CIAATTG。请分析回答：

（1）为获得AH基因的cDNA，先要从漏斗蜘蛛毒素肽分泌细胞中提取_________，再利用反应体系中添加__________，从而准确合成出AH基因的cDNA，排除其他提取物的干扰。若从漏斗蜘蛛其他组织细胞提取，则难以成功，原因是其他组织细胞中_________。
（2）利用图中的质粒和AH基因构建重组质粒时，宜选用________双酶切质粒，再选用_________切割目的基因，将切割后获得的DNA片段混合，经DNA连接酶处理后，再与大肠杆菌混合培养，在含有适量氯霉素的培养基中添加适量冷冻的________，以促进转化。
（3）经上述处理培养后，获得存活的大肠杆菌中应含有的质粒是________，原因是_________。

Ⅰ.图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示质粒，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示目的基因及限制酶切点。请回答下列问题：

（1）图1中限制酶EcoRⅠ的特点是_____。
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是_____。
A．解旋酶作用于①处，DNA连接酶作用于②处
B．③和④相间排列，构成了DNA分子的基本骨架
C．③代表磷酸，④代表脱氧核苷酸
D．用该片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有4³种
（3）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是_____。
（4）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含_____基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。
Ⅱ.酶工程包括酶的生产、酶的分离纯化、酶的固定化和酶的应用。
（5）生产提纯分泌型脂肪酶工程中，加入硫酸铵使酶与其他杂质分离，该过程属于酶分离提纯步骤中的_____。
A．过滤酶 B．干燥酶 C．层析酶 D．沉淀酶
（6）因固化条件不同，会造成固化酶的活力（注：酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量）受到使用次数的影响，由图5信息，你对该固化酶的使用，给予指导性的意见是_____。