研究人员利用农杆菌侵染水稻叶片，经组培、筛选最终获得了一株水稻突变体。利用不同的限制酶处理突变体的总DNA、电泳；并与野生型的处理结果对比，得到图所示放射性检测结果。（注：T-DNA上没有所用限制酶的酶切位点）对该实验的分析错误的是（   ）

A．检测结果时使用了放射性标记的T-DNA片段做探针

B．该突变体产生的根本原因是由于T-DNA插入到水稻核DNA中

C．不同酶切显示的杂交带位置不同，说明T-DNA有不同的插入位置

D．若野生型也出现杂交带，则实验样本可能被污染，检测结果不准确

科研人员利用大肠杆菌构建了抗虫基因文库。最新研究发现漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有显著的杀虫效果，现以p-B质粒为载体，构建AH基因的cDNA文库。图1表示p-B质粒，其中Cm!r表示氯霉素抗性基因，ccdB 基因表达产物能抑制大肠杆菌DNA复制。图中箭头表示相关限制酶的酶切位点，且不同种限制酶识别序列不同，其中Aiu I、Xba I、Ssp I和Mfe I识别的碱基序列和酶切位点分别是AGLCT、T4CTAGA、AATIATT、 CIAATTG。请分析回答：

（1）为获得AH基因的cDNA，先要从漏斗蜘蛛毒素肽分泌细胞中提取_________，再利用反应体系中添加__________，从而准确合成出AH基因的cDNA，排除其他提取物的干扰。若从漏斗蜘蛛其他组织细胞提取，则难以成功，原因是其他组织细胞中_________。
（2）利用图中的质粒和AH基因构建重组质粒时，宜选用________双酶切质粒，再选用_________切割目的基因，将切割后获得的DNA片段混合，经DNA连接酶处理后，再与大肠杆菌混合培养，在含有适量氯霉素的培养基中添加适量冷冻的________，以促进转化。
（3）经上述处理培养后，获得存活的大肠杆菌中应含有的质粒是________，原因是_________。

回答下列（一）（二）小题：
（一）回答与固定化酶相关的问题：
（1）常用固定化果胶酶处理含果胶的污水，其主要优点有___________________，果胶酶可以在_______________等微生物体内找到，酶的固定化方法除了包埋法外，还包括______________、交联法、共价偶联法等。
（2）科研人员用海藻酸钠作为包埋剂来固定小麦酯酶，以硏究固定化酶的相关性质和最佳固定条件。酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量。如图甲、乙为部分研究结果。分析并回答相关问题

①由图甲可知，固定化小麦酯酶的最适宜温度是_______________。
②由图甲和图乙可知，酶对有机溶剂不敏感，但对______________和______________非常敏感。
③用固定化酶技术与微生物降解相比，其作用不需要适宜的（_______）

A．温度	B．酸碱度
C．水分	D．营养

（二）回答与基因工程和动物克隆有关的问题：
（1）可利用______________方法检测某人体内是否有抗体，从而判断某人是否被冠状病毒感染。
（2）上海多家生物公司已研发出冠状病毒检测试剂盒。该方法采用RT-PCR技术对病毒抗原进行检测。2019新型冠状病毒是RNA病毒，应该先用______________将RNA逆转录为cDNA。再设计引物进行PCR扩增检测。
（3）2020年1月10日，科学家完成病毒基因组测序，经科学家初步研究发现冠状病毒核衣壳N蛋白具有特异抗原性。因此可用____________获取目的基因，利用____________与表达载体构建成重组DNA分子。导入经____________处理的受体细菌，诱导表达后分离纯化核衣壳N蛋白作为抗原。
（4）将核衣壳N蛋白注射到小鼠体内，获取经免疫的脾细胞，再与小鼠的_____________融合，经筛选获得杂交瘤细胞系。再经____________培养法筛选岀杂交瘤细胞株。经体内或体外扩増培养，获得单克隆抗体。此抗体优点是___________________________________________________。

将外源基因整合到叶绿体基因组中并成功表达，这就是叶绿体转基因技术，该技术能有效改良植物的品质。 请回答下列问题：
（1）若要在短时间内大量扩增外源基因，可采用PCR技术，该技术利用了_______________的原理。
（2）对大多数高等植物而言，与传统的细胞核转基因相比，叶绿体转基因更稳定，因其不会随_____(填
“花粉”或“卵细胞”)传给后代，从而保持了_________(填“父本”或“母本”)的遗传特性。
（3）利用_______________处理植物体细胞可得到原生质体，再通过_____________法将目的基因导入原生质体，当原生质体再长出__________________时，便可通过植物组织培养技术培养出相应的转基因幼苗。
（4）一个完整的基因表达载体应该包括启动子、_________________________________等，启动子位于基因的首端，它是____________________，有它才能启动基因转录。

CRISPR/Cas9系统基因编辑技术是近年来颇受关注的一项新技术。该基因表达系统主要包含引导RNA和Cas9蛋白两个部分，引导RNA能识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白结合到相应位置并剪切DNA，最终实现对靶基因序列的编辑。研究人员试图用CRISPR/Cas9系统对水稻产量基因Q基因进行编辑，请回答下列问题：
（1）研究发现，CRISPR/Cas9仅存在于原核生物，故需借助____________技术才能在水稻细胞中发挥作用。Cas9蛋白与_____________酶的功能相似。
（2）首先依据___________的部分序列设计DNA片段A（负责编码相应引导RNA），再将片段A与含有Cas9基因的质粒B连接，以构建编辑水稻Q基因的CRISPR/Cas9系统基因表达载体（如图所示）。位点Ⅰ、位点Ⅱ分别表示_____________酶切位点。

（3）质粒B大小为2.5kb（位点Ⅰ与位点Ⅱ相隔60b），经酶切后的片段A大小为0.5kb（千碱基对），连接形成的表达载体大小为___________kb。
（4）常用农杆菌转化法将目的基因导入水稻受体细胞，依据农杆菌的侵染特点，目的基因将插入到Ti质粒的_______上，经过转化作用，进入水稻细胞，并将其插入到____________，从而使其得以维持稳定和表达。
（5）CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成脱靶，试从引导RNA的角度分析脱靶的原因_________________________________________________。