某植物蛋白酶抑制剂Ⅱ基因是重要的抗虫基因，该基因转录的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因，具体原理如下图所示，其中①〜③表示有关过程，Ⅰ〜Ⅲ表示有关物质。请回答下列问题：

（1）过程①反应体系中，需要加入_________ 种引物，还需加入_________ 酶，生成杂合链物质Ⅰ。
（2）利用DNA末段转移酶催化过程②，使cDNA单链左侧末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列（AAA(A)n），其目的是_________________，进而利于过程③扩增获得目的基因序列Ⅲ，过程③反应体系需要添加的新引物序列是____________________ 。该过程需_________酶。
（3）与物质Ⅲ相比，物质Ⅰ化学组成不同的是____________________。
（4）在物质Ⅲ的两端通常还需要增加______________ 序列，以便与相应的载体重组，再利用 ________ 处理大肠杆菌等，以利于将重组质粒导入细胞，构建cDNA文库。

干扰素可以用于治疗病毒感染和癌症，但在体外保存相当困难。如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸，那么，在－70℃条件下可以保存半年，这需要利用蛋白质工程来完成。请回答下列问题：
(1)天然蛋白质的合成过程是按照___________进行的，而蛋白质工程与之相反。蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过___________，对现有蛋白质进行改造，或制造新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需要。
(2)若将干扰素的一个半胱氨酸变成丝氨酸，推测相应的脱氧核苷酸序列___________(填“是”或“不是”)唯一。可利用PCR技术扩增相应基因，该技术的前提是要有一段___________，以便根据这一序列合成引物。
(3)科学家在基因工程和蛋白质工程中常用大肠杆菌作为受体细胞，原因是___________(答出两点即可)。大肠杆菌常用的转化方法是：首先用___________处理后成为___________细胞，再与重组表达载体溶于缓冲溶液中完成转化。
(4)干扰素基因是否翻译出蛋白质，可用___________(物质)进行检测。

PCR技术成为分子生物学实验室的一种常规手段，其原理是DNA半保留复制。
（一）在试管中进行DNA的人工复制（如下图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。

①PCR即___________________________，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。加热使DNA双链打开，这一步是打开________键，称为变性。
②当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，此过程中原料是脱氧核苷酸，遵循的原则是____________________________。
③若将一个用¹⁵N标记的DNA分子放入试管中，以¹⁴N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制4次以后，则¹⁵N标记的DNA分子占全部DNA总数的比例为________。若继续循环，该DNA片段共经过30次循环后需要________个引物。
④某样品DNA分子中共含5 000个碱基对，碱基数量满足：A+T/G+C＝2/3，若经4次循环，至少需要向试管中加入________个腺嘌呤脱氧核苷酸。(不考虑引物所对应的片段)
（二）下图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。

①图中实验材料A为洋葱。研磨前加入的B为洗涤剂和食盐，加入洗涤剂的目的是________________；加入食盐的目的是________________。
②通过上述所示步骤得到滤液C后，再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液，再过滤得到滤液D，向滤液D中加入蒸馏水的目的是________________。
③DNA鉴定的原理是____________________________________________。

在PCR扩增DNA的实验中，预计一分子DNA经过30次循环后，应该得到2³⁰个DNA分子，但是结果只有约2¹⁰个DNA分子，那么不是出现该现象的原因是（）

A．Taq酶的活力不够，或活性受到抑制

B．系统设计欠妥

C．循环次数不够

D．引物不能与亲链结合

用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液（Marker），10号为蒸馏水。PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出分析不合理的是

A．PCR产物的分子大小在250至500bp之间

B．3号样品为不含目的基因的载体DNA

C．9号样品对应植株不是所需的转基因植株

D．10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰