科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶_____分别对______进行切割，切割后产生的DNA片段分别为__________种、_______________种。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有_______________作为标记基因。
（3）研究人员通常采用_______________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用_______________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的_______________过程。

al一抗胰蛋白酶缺乏症是一种在北美较为常见的单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。对于该病患者常采用注射入al—抗胰蛋白酶来缓解症状。图1表示获取al—抗胰蛋白酶基因的两种方法，请回答下列问题：

(1)a过程是在__________酶的作用下完成的，该酶能够识别____________的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
(2)怎样从基因文库中得到所需的目的基因呢？简单地说就是根据___________,如基因在染色体上的位置、基因的功能等特性来获取。
(3)为了获得更多的目的基因，可用PCR技术扩增目的基因。PCR技术是一项在__________复制特定DNA片段的核酸合成技术。
(4)图2为矿区废弃地的生态恢复工程流程图，图2中的CD②分别为_________、___________,建立该生态统所要遵循的主要原理有___________________(写出1个即可)。
(5)图2中种植了抗逆性的植物，对于转基因生物人们存在安全方面的顾虑,按照对人类其中安全等动植物微生物和生态环境的危害程度，将农业转基因生物分为四个等级，其中安全等级级Ⅰ是指_______________(填“尚不存在”“具有低度”“具有高度”)危险。

科研人员利用大肠杆菌构建了抗虫基因文库。最新研究发现漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有显著的杀虫效果，现以p-B质粒为载体，构建AH基因的cDNA文库。图1表示p-B质粒，其中Cm!r表示氯霉素抗性基因，ccdB 基因表达产物能抑制大肠杆菌DNA复制。图中箭头表示相关限制酶的酶切位点，且不同种限制酶识别序列不同，其中Aiu I、Xba I、Ssp I和Mfe I识别的碱基序列和酶切位点分别是AGLCT、T4CTAGA、AATIATT、 CIAATTG。请分析回答：

（1）为获得AH基因的cDNA，先要从漏斗蜘蛛毒素肽分泌细胞中提取_________，再利用反应体系中添加__________，从而准确合成出AH基因的cDNA，排除其他提取物的干扰。若从漏斗蜘蛛其他组织细胞提取，则难以成功，原因是其他组织细胞中_________。
（2）利用图中的质粒和AH基因构建重组质粒时，宜选用________双酶切质粒，再选用_________切割目的基因，将切割后获得的DNA片段混合，经DNA连接酶处理后，再与大肠杆菌混合培养，在含有适量氯霉素的培养基中添加适量冷冻的________，以促进转化。
（3）经上述处理培养后，获得存活的大肠杆菌中应含有的质粒是________，原因是_________。

回答下列（一）（二）小题：
（一）回答与固定化酶相关的问题：
（1）常用固定化果胶酶处理含果胶的污水，其主要优点有___________________，果胶酶可以在_______________等微生物体内找到，酶的固定化方法除了包埋法外，还包括______________、交联法、共价偶联法等。
（2）科研人员用海藻酸钠作为包埋剂来固定小麦酯酶，以硏究固定化酶的相关性质和最佳固定条件。酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量。如图甲、乙为部分研究结果。分析并回答相关问题

①由图甲可知，固定化小麦酯酶的最适宜温度是_______________。
②由图甲和图乙可知，酶对有机溶剂不敏感，但对______________和______________非常敏感。
③用固定化酶技术与微生物降解相比，其作用不需要适宜的（_______）

A．温度	B．酸碱度
C．水分	D．营养

（二）回答与基因工程和动物克隆有关的问题：
（1）可利用______________方法检测某人体内是否有抗体，从而判断某人是否被冠状病毒感染。
（2）上海多家生物公司已研发出冠状病毒检测试剂盒。该方法采用RT-PCR技术对病毒抗原进行检测。2019新型冠状病毒是RNA病毒，应该先用______________将RNA逆转录为cDNA。再设计引物进行PCR扩增检测。
（3）2020年1月10日，科学家完成病毒基因组测序，经科学家初步研究发现冠状病毒核衣壳N蛋白具有特异抗原性。因此可用____________获取目的基因，利用____________与表达载体构建成重组DNA分子。导入经____________处理的受体细菌，诱导表达后分离纯化核衣壳N蛋白作为抗原。
（4）将核衣壳N蛋白注射到小鼠体内，获取经免疫的脾细胞，再与小鼠的_____________融合，经筛选获得杂交瘤细胞系。再经____________培养法筛选岀杂交瘤细胞株。经体内或体外扩増培养，获得单克隆抗体。此抗体优点是___________________________________________________。

研究人员利用农杆菌侵染水稻叶片，经组培、筛选最终获得了一株水稻突变体。利用不同的限制酶处理突变体的总DNA、电泳；并与野生型的处理结果对比，得到图所示放射性检测结果。（注：T-DNA上没有所用限制酶的酶切位点）对该实验的分析错误的是（   ）

A．检测结果时使用了放射性标记的T-DNA片段做探针

B．该突变体产生的根本原因是由于T-DNA插入到水稻核DNA中

C．不同酶切显示的杂交带位置不同，说明T-DNA有不同的插入位置

D．若野生型也出现杂交带，则实验样本可能被污染，检测结果不准确