下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、Hind Ⅲ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答下面的问题。

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用____________（填限制酶的名称）限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因；连接酶切产物要用到DNA连接酶，按其不同，可分为两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。
（2）理论上讲，构建载体时的连接产物可能有____________、____________、____________三种。
（3）筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。
（4）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_______。

A．启动子

B．tetR

C．复制原点

D．ampR

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶_____分别对______进行切割，切割后产生的DNA片段分别为__________种、_______________种。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有_______________作为标记基因。
（3）研究人员通常采用_______________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用_______________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的_______________过程。

干扰素是一种重要的免疫物质，具有抗病毒、调节免疫等功效。研究人员利用基因工程通过培育山羊乳腺生物反应器大量生产β-干扰素。请回答下列问题：
（1）获取人β-干扰素基因常用的方法有两种，一种是从人的相应细胞中获取该基因的mRNA 逆转录合成___________，该过程需要的酶是____________。另一种是PCR技术，该技术的原理是________________，在PCR过程中，需用到______________酶。
（2）重组人β-干扰素基因表达载体由山羊β-酪蛋白基因启动子、人β-干扰素基因、标记基因和终止子等组成，其中___________________决定了人β-干扰素基因只能在山羊乳腺细胞中特异性表达，将该重组表达载体导入受体细胞一般采用______________________。
（3）一般需要将重组人β-干扰素基因表达载体导入___________________（填“雄性”或“雌性”）胚胎细胞中。在转基因羊发育成熟时，为了检测羊奶中是否有人β-干扰素，可用________________________方法。

天然玫瑰因缺少控制合成蓝色色素的基因B而不能开蓝色花。科学家从开蓝色花的矮牵牛中了基因B后，利用生物工程技术培育出了开蓝色花的玫瑰。下图为该育种过程的操作流程。

注：Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。外源DNA插入到Amp^r或Tet^r中会导致相应的基因失活。限制酶EcoRⅠ、HindⅢ和BamHⅠ的识别序列及切割位点均不相同。
请回答下列问题：
（1）图中将基因B导入玫瑰细胞的方法称为_____________。选择Ti质粒作为运载体的原因是Ti质粒上的__________可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。
（2）在构建重组Ti质粒时，应选用图中的_________(限制酶）。有人用该种限制酶分别切割Ti质粒和基因B后混合，加入DNA连接酶进行反应，用得到的混合物直接转化细菌甲。结果得到了四种细菌甲：未被转化的、含环状基因B的、含Ti质粒的和含重组Ti质粒的。筛选目的细菌甲时，先用含_________的固体培养基培养，不能生长的是_________的细菌甲；然后再将能生长的细菌甲接种到含_________的固体培养基中，目的细菌甲在此培养基中___________(填“能”或“不能”）生长。
（3）由玫瑰韧皮部细胞形成组织乙的过程，实质是___________的过程。

乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白，免疫接种实验表明这两种蛋白质都可引起实验动物的免疫反应。科研人员用农杆菌转化法培育出转基因番茄，用于生产可口服的乙肝病毒疫苗，回答下列问题：

（1）T1蛋白和T2蛋白进入实验动物的肠道后，会被实验动物小肠黏膜上的一种M细胞当做_________处理，进而引发一系列的免疫反应，最终产生相应的_________________，使实验动物获得了对乙肝病毒的免疫能力。
（2）用转基因番茄生产可口服的乙肝病毒疫苗（含T1蛋白），所用的目的基因是____________，所用的运载体是土壤农杆菌的________________。
（3）可利用PCR技术扩增目的基因，其前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成_________。PCR一般要经历三十多次循环，目的基因在乙肝病毒DNA中的位置如图所示，则在____________（填“第一次”、“第二次”或“第三次”）次循环结束后，即可出现两条链等长的目的基因片断。 
（4）获得转基因番茄植株后，通过分子检测，已确定该植株所结番茄中含有T2蛋白，此后还需要进行个体生物学水平的鉴定，例如___________________________________。