图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由_________________________连接。
（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为_______________________
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有_____种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过_____________技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_____________。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般需要用添加____________的培养基进行培养，用影印法接种到只含________________的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。
（5）假设用BamH Ⅰ切割DNA获取目的基因，用Mbo Ⅰ切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BamH Ⅰ？为什么？___

珙桐（2n=40）被称为植物活化石，为进一步保护珙桐，保护生物的多样性。2015年中科院国家重点实验室科研小组来到贵州梵净山珙桐保护基地采集了珙桐材料进行相关的研究。回答问题：
（1）为增强珙桐抗虫特性，科学家需要将苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因导入珙桐中，使珙桐的抗药性增强。①用______________酶获取目的基因；②将目的基因导入珙桐细胞；③将受体珙桐细胞进行植物组织培养获得抗药幼苗，其原理是______________；④目的基因的检测。
（2）目的基因一般只导入受体细胞同源染色体的一条上，可将含有目的基因的植株看成杂合子（Aa）。现有一通过基因工程获得的具有抗虫性状的珙桐幼苗（Aa），为了获得能够稳定遗传的抗虫植株，可采用多种育种方法，其中最简单的方法是是进行____________，育种年限最短的是进行____________。若对该植株先用秋水仙素处理转变成基因型为AAaa的四倍体，再经过花药离体培养也能获得稳定遗传的子代，其中秋水仙素的作用是_____________，符合要求的子代比例是_____________。
（3）研究发现，珙桐植株的另一对同源染色体上，显性基因B会抑制抗虫基因A的表达，使得珙桐不具有抗虫性状。若用没有抗虫性状的植株AaBb的基因型植株自交，子代表现型及比例为__________。

随着粮食需求量的增加和气候变化影响的不断加大，水稻的干旱脆弱性日益受到关注。据媒体报道，现在某理化研究所可持续资源科学中心正在开发一种全新的转基因水稻，其中导入了来自杂草拟南芥的GOLS2基因，使其更耐旱。GOLS2基因表达可提高植物细胞内糖类含量，降低植物叶片气孔开度。科研人员将拟南芥GOLS2基因导入并整合到水稻染色体上。请回答下列问题：
（1）从cDNA文库中获得的目的基因__________（填“含有”或“不含有”）启动子和终止子。通过PCR技术获取GOLS2基因的原理是________________，需设计____________种引物。
（2）GOLS2基因可以整合到水稻染色体上的遗传学物质基础是______________。需将GOLS2基因拼接在运载体上才能成功转化，转化指___________________。
（3）基因表达载体的组成除了GOLS2因外，还必须有___________________等；在构建基因表达载体过程中，常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在GOLS2因上游，双启动子的作用可能是__________________________，进一步提高细胞内糖类含量。

香蕉原产热带地区，是我国南方重要的经济作物之一。但南方冬季常受强寒潮和霜冻影响，对香蕉生长发育影响很大。由香蕉束顶病毒（BBTV，单链环状DNA病毒）引起的香蕉束顶病，对香蕉生产的危害十分严重。目前香蕉栽培品种多为三倍体，由于无性繁殖是香蕉繁育的主要方式，缺少遗传变异性，因此利用基因工程等现代科技手段提高香蕉的品质，具有重要意义。
（1）脱毒香蕉苗的获得，可选取_________为材料进行组织培养，依据是_____________。
（2）建立可靠的BBTV检测方法可以监控脱毒香蕉苗的质量，请指出两种检测病毒存在的方法①_________________________；②_____________________________。
（3）结合诱变育种从细胞工程的角度出发，简述一种培育抗寒香蕉品种的方法及步骤：__________________________________________________________。

CRISPR/Cas9系统基因编辑技术是近年来颇受关注的一项新技术。该基因表达系统主要包含引导RNA和Cas9蛋白两个部分，引导RNA能识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白结合到相应位置并剪切DNA，最终实现对靶基因序列的编辑。研究人员试图用CRISPR/Cas9系统对水稻产量基因Q基因进行编辑，请回答下列问题：
（1）研究发现，CRISPR/Cas9仅存在于原核生物，故需借助____________技术才能在水稻细胞中发挥作用。Cas9蛋白与_____________酶的功能相似。
（2）首先依据___________的部分序列设计DNA片段A（负责编码相应引导RNA），再将片段A与含有Cas9基因的质粒B连接，以构建编辑水稻Q基因的CRISPR/Cas9系统基因表达载体（如图所示）。位点Ⅰ、位点Ⅱ分别表示_____________酶切位点。

（3）质粒B大小为2.5kb（位点Ⅰ与位点Ⅱ相隔60b），经酶切后的片段A大小为0.5kb（千碱基对），连接形成的表达载体大小为___________kb。
（4）常用农杆菌转化法将目的基因导入水稻受体细胞，依据农杆菌的侵染特点，目的基因将插入到Ti质粒的_______上，经过转化作用，进入水稻细胞，并将其插入到____________，从而使其得以维持稳定和表达。
（5）CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成脱靶，试从引导RNA的角度分析脱靶的原因_________________________________________________。