科研人员利用大肠杆菌构建了抗虫基因文库。最新研究发现漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有显著的杀虫效果，现以p-B质粒为载体，构建AH基因的cDNA文库。图1表示p-B质粒，其中Cm!r表示氯霉素抗性基因，ccdB 基因表达产物能抑制大肠杆菌DNA复制。图中箭头表示相关限制酶的酶切位点，且不同种限制酶识别序列不同，其中Aiu I、Xba I、Ssp I和Mfe I识别的碱基序列和酶切位点分别是AGLCT、T4CTAGA、AATIATT、 CIAATTG。请分析回答：

（1）为获得AH基因的cDNA，先要从漏斗蜘蛛毒素肽分泌细胞中提取_________，再利用反应体系中添加__________，从而准确合成出AH基因的cDNA，排除其他提取物的干扰。若从漏斗蜘蛛其他组织细胞提取，则难以成功，原因是其他组织细胞中_________。
（2）利用图中的质粒和AH基因构建重组质粒时，宜选用________双酶切质粒，再选用_________切割目的基因，将切割后获得的DNA片段混合，经DNA连接酶处理后，再与大肠杆菌混合培养，在含有适量氯霉素的培养基中添加适量冷冻的________，以促进转化。
（3）经上述处理培养后，获得存活的大肠杆菌中应含有的质粒是________，原因是_________。

下图是某转基因抗虫水稻培育流程图,下列有关分析错误的是(    )

A．④过程依据细胞的全能性原理

B．毒蛋白基因的获得需要RNA聚合酶

C．①过程所依据的理论基础之一是DNA分子结构的相似性

D．该基因工程成功的标志是毒蛋白基因在宿主细胞中稳定维持和表达其遗传特性

图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由_________________________连接。
（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为_______________________
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有_____种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过_____________技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_____________。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般需要用添加____________的培养基进行培养，用影印法接种到只含________________的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。
（5）假设用BamH Ⅰ切割DNA获取目的基因，用Mbo Ⅰ切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BamH Ⅰ？为什么？___

GRFT是一种于红藻的外源凝集素，能作为治疗艾滋病的候选药物。某实验小组将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组中，发现烟草中GRFT基因的表达量可达60%~90%。请回答下列问题：
（1）将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组的方法为__________，该方法能将GRFT基因导人烟草细胞的染色体基因组，利用的是T—DNA具有_________的特点。
（2）构建重组质粒时可插入NPTII基因，具有该基因的转基因植物的叶绿体离体培养时会出现退绿现象，据此可知重组质粒中的NPTII基因实质上是一种_________，其作用是_________。基因工程中的运载体除了质粒外，还有___________。
（3）欲大量获得GRFT，可利用植物组织培养技术将转基因烟草细胞培育到______阶段，原因是该阶段的细胞具有______________________的特点。

科学家将绿色荧光蛋白(GFP)基因转入小鼠胚胎干细胞(ES)内，GFP基因若表达就会使细胞带有绿色荧光，继而利用带有绿色荧光的ES细胞培育出嵌合型的小鼠用于科学研究，流程如图所示。请回答：

(1)在步骤①中构建基因表达载体时，需要在GFP基因的首端加入____________酶识别和结合的部位，有了它才能驱动GFP基因转录出mRNA，最终获得GFP。GFP基因的尾端还需有_________，使转录在需要的地方停止下来。
(2)步骤②的受体细胞是小鼠ES细胞，ES细胞一般从囊胚的___________分离得到，且ES细胞在形态上表现为________________的特点。在培养ES细胞时，细胞充满培养皿底部后停止分裂，这种现象称为__________________。如果想继续培养则需要重新用__________处理，然后分瓶继续培养，这样的培养过程通常被称为____________________培养。
(3)图中重组囊胚在步骤⑤之前要先检测是否有绿色荧光细胞，再通过___________技术移入代孕母鼠子宫内继续发育。