生长激素缺乏症患者也被称为“袖珍人”，因生长激素不足而导致生长发育障碍，身材矮小。该病发病率为1/8500，是一种内分泌疾病。目前一般通过注射生长激素治疗，科研人员尝试利用奶牛乳腺生物反应器生产生长激素，以保证临床用量。请回答下列问题：
（1）该操作中的目的基因是_______________，可以从_______直接获取外，还可以从供体动物的______细胞中提取mRNA，在________的催化下合成。（2）下表为四种限制酶的识别序列和酶切位点，图1为含有生长激素基因的DNA片段及其具有的限制酶切位点。若需利用酶切法（只用一种酶）获得生长激素基因，最应选择的限制酶是_____________。

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmaⅠ
酶切 位点

 
（3）利用转基因牛、羊的乳汁提取药物的工艺简单，要使药用蛋白基因在奶牛乳腺中特异性表达，应将药用蛋白基因与________________________等调控元件重组在一起，导入性染色体组成为________的受精卵中。如果将药用蛋白基因转移到动物的膀胱上皮细胞中，利用转基因牛、羊的尿液生产提取药物，比乳汁提取药物的更大优越性在于__________________、__________________。

al一抗胰蛋白酶缺乏症是一种在北美较为常见的单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。对于该病患者常采用注射入al—抗胰蛋白酶来缓解症状。图1表示获取al—抗胰蛋白酶基因的两种方法，请回答下列问题：

(1)a过程是在__________酶的作用下完成的，该酶能够识别____________的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
(2)怎样从基因文库中得到所需的目的基因呢？简单地说就是根据___________,如基因在染色体上的位置、基因的功能等特性来获取。
(3)为了获得更多的目的基因，可用PCR技术扩增目的基因。PCR技术是一项在__________复制特定DNA片段的核酸合成技术。
(4)图2为矿区废弃地的生态恢复工程流程图，图2中的CD②分别为_________、___________,建立该生态统所要遵循的主要原理有___________________(写出1个即可)。
(5)图2中种植了抗逆性的植物，对于转基因生物人们存在安全方面的顾虑,按照对人类其中安全等动植物微生物和生态环境的危害程度，将农业转基因生物分为四个等级，其中安全等级级Ⅰ是指_______________(填“尚不存在”“具有低度”“具有高度”)危险。

乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白，免疫接种实验表明这两种蛋白质都可引起实验动物的免疫反应。科研人员用农杆菌转化法培育出转基因番茄，用于生产可口服的乙肝病毒疫苗，回答下列问题：

（1）T1蛋白和T2蛋白进入实验动物的肠道后，会被实验动物小肠黏膜上的一种M细胞当做_________处理，进而引发一系列的免疫反应，最终产生相应的_________________，使实验动物获得了对乙肝病毒的免疫能力。
（2）用转基因番茄生产可口服的乙肝病毒疫苗（含T1蛋白），所用的目的基因是____________，所用的运载体是土壤农杆菌的________________。
（3）可利用PCR技术扩增目的基因，其前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成_________。PCR一般要经历三十多次循环，目的基因在乙肝病毒DNA中的位置如图所示，则在____________（填“第一次”、“第二次”或“第三次”）次循环结束后，即可出现两条链等长的目的基因片断。 
（4）获得转基因番茄植株后，通过分子检测，已确定该植株所结番茄中含有T2蛋白，此后还需要进行个体生物学水平的鉴定，例如___________________________________。

GRFT是一种于红藻的外源凝集素，能作为治疗艾滋病的候选药物。某实验小组将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组中，发现烟草中GRFT基因的表达量可达60%~90%。请回答下列问题：
（1）将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组的方法为__________，该方法能将GRFT基因导人烟草细胞的染色体基因组，利用的是T—DNA具有_________的特点。
（2）构建重组质粒时可插入NPTII基因，具有该基因的转基因植物的叶绿体离体培养时会出现退绿现象，据此可知重组质粒中的NPTII基因实质上是一种_________，其作用是_________。基因工程中的运载体除了质粒外，还有___________。
（3）欲大量获得GRFT，可利用植物组织培养技术将转基因烟草细胞培育到______阶段，原因是该阶段的细胞具有______________________的特点。

CRISPR/Cas9系统基因编辑技术是近年来颇受关注的一项新技术。该基因表达系统主要包含引导RNA和Cas9蛋白两个部分，引导RNA能识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白结合到相应位置并剪切DNA，最终实现对靶基因序列的编辑。研究人员试图用CRISPR/Cas9系统对水稻产量基因Q基因进行编辑，请回答下列问题：
（1）研究发现，CRISPR/Cas9仅存在于原核生物，故需借助____________技术才能在水稻细胞中发挥作用。Cas9蛋白与_____________酶的功能相似。
（2）首先依据___________的部分序列设计DNA片段A（负责编码相应引导RNA），再将片段A与含有Cas9基因的质粒B连接，以构建编辑水稻Q基因的CRISPR/Cas9系统基因表达载体（如图所示）。位点Ⅰ、位点Ⅱ分别表示_____________酶切位点。

（3）质粒B大小为2.5kb（位点Ⅰ与位点Ⅱ相隔60b），经酶切后的片段A大小为0.5kb（千碱基对），连接形成的表达载体大小为___________kb。
（4）常用农杆菌转化法将目的基因导入水稻受体细胞，依据农杆菌的侵染特点，目的基因将插入到Ti质粒的_______上，经过转化作用，进入水稻细胞，并将其插入到____________，从而使其得以维持稳定和表达。
（5）CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成脱靶，试从引导RNA的角度分析脱靶的原因_________________________________________________。