干扰素是一种重要的免疫物质，具有抗病毒、调节免疫等功效。研究人员利用基因工程通过培育山羊乳腺生物反应器大量生产β-干扰素。请回答下列问题：
（1）获取人β-干扰素基因常用的方法有两种，一种是从人的相应细胞中获取该基因的mRNA 逆转录合成___________，该过程需要的酶是____________。另一种是PCR技术，该技术的原理是________________，在PCR过程中，需用到______________酶。
（2）重组人β-干扰素基因表达载体由山羊β-酪蛋白基因启动子、人β-干扰素基因、标记基因和终止子等组成，其中___________________决定了人β-干扰素基因只能在山羊乳腺细胞中特异性表达，将该重组表达载体导入受体细胞一般采用______________________。
（3）一般需要将重组人β-干扰素基因表达载体导入___________________（填“雄性”或“雌性”）胚胎细胞中。在转基因羊发育成熟时，为了检测羊奶中是否有人β-干扰素，可用________________________方法。

图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由_________________________连接。
（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为_______________________
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有_____种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过_____________技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_____________。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般需要用添加____________的培养基进行培养，用影印法接种到只含________________的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。
（5）假设用BamH Ⅰ切割DNA获取目的基因，用Mbo Ⅰ切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BamH Ⅰ？为什么？___

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶_____分别对______进行切割，切割后产生的DNA片段分别为__________种、_______________种。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有_______________作为标记基因。
（3）研究人员通常采用_______________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用_______________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的_______________过程。

阅读如下材料：
材料甲：科学家将人的生长激素基因导入母牛的体内，待母牛进入泌乳期后，变成了批量生产人生长激素的“乳腺生物反应器”。
材料乙：干扰素可用于治疗病毒感染和癌症，但在体外保存相当困难，科学家将其分子上一个半胱氨酸变成丝氨酸，在—70℃条件下可以保存半年。
回答下列问题：
（1）材料甲属于________工程的范畴。欲使转基因母牛仅在乳汁中含有人的生长激素，需在构建基因表达载体时将人生长激素基因与牛_______________________重组在一起，再将构建成功的基因表达载体导入小鼠的____________中（填细胞名称），常用的导入方法为_______________。
（2）材料乙属于___________工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过__________或__________，对原有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质的技术。这是在基因工程基础是上延伸出来的第二代基因工程。我们为什么要进行蛋白质工程的研究呢？______________。

Ⅰ.图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示质粒，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示目的基因及限制酶切点。请回答下列问题：

（1）图1中限制酶EcoRⅠ的特点是_____。
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是_____。
A．解旋酶作用于①处，DNA连接酶作用于②处
B．③和④相间排列，构成了DNA分子的基本骨架
C．③代表磷酸，④代表脱氧核苷酸
D．用该片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有4³种
（3）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是_____。
（4）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含_____基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。
Ⅱ.酶工程包括酶的生产、酶的分离纯化、酶的固定化和酶的应用。
（5）生产提纯分泌型脂肪酶工程中，加入硫酸铵使酶与其他杂质分离，该过程属于酶分离提纯步骤中的_____。
A．过滤酶 B．干燥酶 C．层析酶 D．沉淀酶
（6）因固化条件不同，会造成固化酶的活力（注：酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量）受到使用次数的影响，由图5信息，你对该固化酶的使用，给予指导性的意见是_____。