al一抗胰蛋白酶缺乏症是一种在北美较为常见的单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。对于该病患者常采用注射入al—抗胰蛋白酶来缓解症状。图1表示获取al—抗胰蛋白酶基因的两种方法，请回答下列问题：

(1)a过程是在__________酶的作用下完成的，该酶能够识别____________的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
(2)怎样从基因文库中得到所需的目的基因呢？简单地说就是根据___________,如基因在染色体上的位置、基因的功能等特性来获取。
(3)为了获得更多的目的基因，可用PCR技术扩增目的基因。PCR技术是一项在__________复制特定DNA片段的核酸合成技术。
(4)图2为矿区废弃地的生态恢复工程流程图，图2中的CD②分别为_________、___________,建立该生态统所要遵循的主要原理有___________________(写出1个即可)。
(5)图2中种植了抗逆性的植物，对于转基因生物人们存在安全方面的顾虑,按照对人类其中安全等动植物微生物和生态环境的危害程度，将农业转基因生物分为四个等级，其中安全等级级Ⅰ是指_______________(填“尚不存在”“具有低度”“具有高度”)危险。

CRISPR/Cas9系统基因编辑技术是近年来颇受关注的一项新技术。该基因表达系统主要包含引导RNA和Cas9蛋白两个部分，引导RNA能识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白结合到相应位置并剪切DNA，最终实现对靶基因序列的编辑。研究人员试图用CRISPR/Cas9系统对水稻产量基因Q基因进行编辑，请回答下列问题：
（1）研究发现，CRISPR/Cas9仅存在于原核生物，故需借助____________技术才能在水稻细胞中发挥作用。Cas9蛋白与_____________酶的功能相似。
（2）首先依据___________的部分序列设计DNA片段A（负责编码相应引导RNA），再将片段A与含有Cas9基因的质粒B连接，以构建编辑水稻Q基因的CRISPR/Cas9系统基因表达载体（如图所示）。位点Ⅰ、位点Ⅱ分别表示_____________酶切位点。

（3）质粒B大小为2.5kb（位点Ⅰ与位点Ⅱ相隔60b），经酶切后的片段A大小为0.5kb（千碱基对），连接形成的表达载体大小为___________kb。
（4）常用农杆菌转化法将目的基因导入水稻受体细胞，依据农杆菌的侵染特点，目的基因将插入到Ti质粒的_______上，经过转化作用，进入水稻细胞，并将其插入到____________，从而使其得以维持稳定和表达。
（5）CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成脱靶，试从引导RNA的角度分析脱靶的原因_________________________________________________。

阅读如下材料：
材料甲：科学家将人的生长激素基因导入母牛的体内，待母牛进入泌乳期后，变成了批量生产人生长激素的“乳腺生物反应器”。
材料乙：干扰素可用于治疗病毒感染和癌症，但在体外保存相当困难，科学家将其分子上一个半胱氨酸变成丝氨酸，在—70℃条件下可以保存半年。
回答下列问题：
（1）材料甲属于________工程的范畴。欲使转基因母牛仅在乳汁中含有人的生长激素，需在构建基因表达载体时将人生长激素基因与牛_______________________重组在一起，再将构建成功的基因表达载体导入小鼠的____________中（填细胞名称），常用的导入方法为_______________。
（2）材料乙属于___________工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过__________或__________，对原有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质的技术。这是在基因工程基础是上延伸出来的第二代基因工程。我们为什么要进行蛋白质工程的研究呢？______________。

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、Hind Ⅲ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答下面的问题。

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用____________（填限制酶的名称）限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因；连接酶切产物要用到DNA连接酶，按其不同，可分为两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。
（2）理论上讲，构建载体时的连接产物可能有____________、____________、____________三种。
（3）筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。
（4）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_______。

A．启动子

B．tetR

C．复制原点

D．ampR

葡萄酒是葡萄汁经酵母菌发酵而成的。酿制葡萄酒的两个简易装置如图所示。回答下列问题：
   
（1）试管中的 X 溶液有助于维持甲装置的瓶中气压相对稳定，与乙装置相比，用甲装置酿制葡萄酒的优点是_____（答出两点即可）。
（2）葡萄汁装入甲装置时，要留有约 1/3 的空间，这种做法的目的是_______________（答出两点即可）。
（3）某同学若用乙装置进行发酵，并设置两个不同处理组（乙 A 和乙 B），乙 A 装置中保留一定量的氧气，乙 B 装置中没有氧气。在其他条件相同且适宜的情况下，测得一段时间内乙 A 和乙 B 中酒精含量的变化趋势及乙 A 中氧气含量的变化趋势如曲线图所示。图中曲线①、③依次表示_____、_____含量的变化趋势。
（4）从细胞呼吸类型看，酵母菌属于_____生物；从同化作用的类型看，酵母菌属于_____（填“自养”或“异养”）生物。
（5）若某高校改进装置采用如图所示的发酵罐进行葡萄酒主发酵过程的研究，下列叙述错误的是：
________。

A.夏季生产果酒时，常需对罐体进行降温处理
B.乙醇为挥发性物质，故发酵过程中空气的进气量不宜太大
C.正常发酵过程中罐内的压力不会低于大气压
D.可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵
（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIF-Ⅱ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。KIF-Ⅱ 基因的高绒质绒山羊的简单流程如图：

（1）转基因过程用到的工具酶有_____和_____。
（2）在过程②中，用_____处理将皮肤租住分散成单个成纤维细胞。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的_______，在培养过程中，应将培养瓶置于_____中培养。
（3）若要获得多只相同的转基因山羊，可进行胚胎分割和胚胎移植。下列关于采用移植技术的叙述，正确的是________
A．采取激素注射等方法对转基因山羊作超数排卵处理
B．体外培养发育到原肠胚期的胚胎即可进行移植
C．使用免疫抑制剂以避免代孕牛对植入胚胎的排斥反应
D．利用胚胎分割技术，同卵双胎较同卵多胎成功率更高