人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）

回答下列问题：
（1）己知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为____。
（2）若t-PA改良基因的粘性末端如图所示，那么需选用限制酶____和____切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接，在连接时需要用到___酶。
（3）应选择____（能／不能）在加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，目的是____。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈____色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
（4）以上制造性能优异的改良t-PA蛋白的过程称为____工程。

下列关于基因工程的叙述，错误的是

A．cDNA文库中的基因可以进行物种间的基因交流

B．转基因棉花是否具抗虫特性可通过检测棉花对某种害虫的抗性来确定

C．外源DNA必须位于重组质粒的起始密码和终止密码之间才能进行表达

D．抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物，从而造成基因污染

治疗侏儒症的唯一方法是向人体注射生长激素。过去生长激素的获得非常困难，需要从动物垂体中提取。而现在可利用基因工程，将人的生长激素基因导入大肠杆菌中，使其生产生长激素。人们从450L大肠杆菌培养液中提取的生长激素，相当于6万头动物的全部产量。图是该过程中重组质粒的构建和筛选过程。请回答下列问题：(Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Tetr为四环素抗性基因)

（1）EcoRⅠ在它识别序列的____________切开时，产生的是黏性末端。该过程中不能选用EcoRⅠ切割目的基因，原因是______________________。
（2）大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用__________处理细胞，使之成为感受态细胞。第二步将 _______与感受态细胞混合，在一定温度下完成转化过程。
（3）利用标记基因筛选重组质粒，将大肠杆菌分别在含有氨苄青霉素和四环素的培养基中培养，成功导入重组质粒的大肠杆菌生长情况是 __________。
（4）科学家现在将生长激素基因与____________等重组在一起，导入哺乳动物受精卵中，然后将受精卵送入经____________激素处理后的母体内，使其生长发育成转基因动物，这些动物乳腺生物反应器中即可表达出生长激素。为了获得同卵多胎的效果，可以使用___________技术。

研究人员用图1中质粒和图2中含目的基因的片段构建重组质粒（图中标注了相关限制酶切割位点），将重组质粒导入大肠杆菌后进行筛选及PCR鉴定。以下叙述不正确的是

A．构建重组质粒的过程应选用BclⅠ和HindⅢ两种限制酶

B．使用DNA连接酶将酶切后的质粒和目的基因片段进行重组

C．能在添加四环素的培养基上生存一定是含有重组质粒的大肠杆菌

D．利用PCR鉴定含目的基因的大肠杆菌时应选用引物甲和引物丙

1978年，人类首次利用转基因技术生产出人胰岛素，其过程大致如图所示：

（1）人胰岛素由A、B两条肽链组成，可根据组成肽链的氨基酸序列，确定编码胰岛素基因的碱基序列，因此可通过____________方法获得目的基因。
（2）β- 半乳糖苷酶能将无色ONPG分解，产物呈黄色，本生产流程中β- 半乳糖苷酶基因作为___________，通过①和②，完成基因表达载体的构建，写出该过程处理DNA分子所需要的酶：________________________________。
（3）③表示将表达载体导入受体细胞，用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是使之变为____________细胞，利于外源DNA侵染，④表示利用化学方法催化二硫键的形成，合成具有生物活性的胰岛素，人体内该过程在胰岛B细胞的_________中进行。