基因工程步骤不包括（   ）

A．对染色体进行改造	B．目的基因与运载体结合
C．将目的基因导入受体细胞	D．目的基因的检测与鉴定

在乙肝病毒（HBV）的结构蛋白中，与疫苗有关的主要是HBSAg蛋白，HBSAg基因已在不同的生物体系中成功表达。如图表示研究人员用农杆菌转化法培育出转基因番茄的过程，用于生产可口服的乙肝病毒疫苗，根据所学知识回答下列问题：

（1）可利用PCR技术扩增HBSAg基因片段，其前提是__________________，以便根据这一序列合成引物。扩增过程中应选择下图中的引物_________（填字母）与HBsAg基因片段结合。

（2）由上图可知，过程①用到的限制酶是_________，在培养农杆菌的培养基中添加__________可筛选得到含重组质粒的农杆菌。
（3）将含有HBSAg基因的农杆菌导入番茄细胞时，受损的番茄组织更有利于农杆菌的侵染，其原因是______________________________，HBSAg基因在番茄植株中遗传信息传递的一般规律为___________________（用流程图表示）。
（4）转基因番茄的细胞具有全能性，在一定的_____________以及无菌、适宜的pH和温度等条件下，可以形成愈伤组织，再进一步发育形成试管苗。过程④的实质是__________________。用该植株结出的番茄果实饲喂小鼠，若在小鼠的血清中检测到__________________，则说明转基因疫苗口服有效。

科学家利用转基因技术培育了OsPHDI（水稻内原本也存在该基因>过量表达的水稻植株，以提高水稻的抗逆性（如抗干旱、抗高盐）。回答下列问题：
（l）为了验证OsPHDI基因的表达是否受逆境诱导，实验组需要给两叶期水稻设置_______条件，实验结果显示_______，说明OsPHDI基因的表达受逆境诱导。
（2）为了培育OsPHDI基因过量表达植株进行如下操作：
①利用PCR技术扩增获得大量OsPHDI基因，该操作的前提是_______。
②将OsPHDI基因与含有GFP（绿色荧光蛋白基因）的载体结合，此处GFP的作用是_______。
③常用_______法将表达载体导入水稻细胞；若受体细胞中出现绿色荧光，能否说明OsPHDI基因已成功导入受体细胞，并说出理由______________。
④最后利用_______技术培育出完整的抗逆性植株，该技术利用的生物学原理是______________

前不久，某生物公司的百白破疫苗检验不符合规定。为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序，科学家研制出基因工程乙肝－百白破（rHB－DTP）四联疫苗，经各项检测均通过 rHB－DTP四联疫苗制检规程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风杆菌的四种类毒素。请分析回答：
（1）为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应mRNA，在______的作用下合成双链 cDNA片段，获得的 cDNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列_____（填“相同”或“不同”）。
（2）由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小，且序列已知，获得目的基因可采用________，然后通过 PCR技术大量扩增____________，此技术的前提是已知一段____________的核苷酸序列以便合成。
（3）把目的基因导入受体细胞时，科学家采用了改造后的腺病毒作为载体，写出你认为科学家选它的理由_________________________________________________。（写出 2点）
（4）研究发现，如果将白喉杆菌类毒素 20位和 24位的氨基酸改变为半胱氨酸，免疫效果更好，请写出此种技术的基本流程_____________。
（5）实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗 3次效果更好，其主要原因是体内产生的_____细胞数量增多，当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是_____。

科研人员通过PCR获得肝细胞特异性启动子——白蛋白启动子，将该启动子与Cre重组酶基因结合构建表达载体，培育出在肝细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠。下列叙述正确的是

A．将该表达载体导入肝细胞以获得转基因小鼠

B．PCR获得白蛋白启动子需设计特异性的引物

C．构建该表达载体需要限制酶和DNA聚合酶

D．通过核酸分子杂交技术检测目的基因是否完成表达