PCR技术成为分子生物学实验室的一种常规手段，其原理是DNA半保留复制。
（一）在试管中进行DNA的人工复制（如下图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。

①PCR即___________________________，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。加热使DNA双链打开，这一步是打开________键，称为变性。
②当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，此过程中原料是脱氧核苷酸，遵循的原则是____________________________。
③若将一个用¹⁵N标记的DNA分子放入试管中，以¹⁴N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制4次以后，则¹⁵N标记的DNA分子占全部DNA总数的比例为________。若继续循环，该DNA片段共经过30次循环后需要________个引物。
④某样品DNA分子中共含5 000个碱基对，碱基数量满足：A+T/G+C＝2/3，若经4次循环，至少需要向试管中加入________个腺嘌呤脱氧核苷酸。(不考虑引物所对应的片段)
（二）下图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。

①图中实验材料A为洋葱。研磨前加入的B为洗涤剂和食盐，加入洗涤剂的目的是________________；加入食盐的目的是________________。
②通过上述所示步骤得到滤液C后，再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液，再过滤得到滤液D，向滤液D中加入蒸馏水的目的是________________。
③DNA鉴定的原理是____________________________________________。

以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图。据图分析，下列说法正确的是（ ）

A．催化①过程的酶是RNA聚合酶

B．④过程发生的变化是引物与单链DNA结合

C．催化②⑤过程的酶都是耐高温的DNA聚合酶

D．③过程需要高温和ATP供能才能完成

荧光原位杂交可用荧光标记的特异DNA片段为探针，与染色体上对应的DNA片段结合，从而将特定的基因在染色体上定位。请回答下列问题:

(1)DNA荧光探针的制备过程如图1所示，DNA酶Ⅰ随机切开了核苷酸之间的_________键从而产生切口，随后在DNA聚合酶Ⅰ作用下，以荧光标记的_________________为原料，合成荧光标记的D NA探针。
(2)图2表示探针与待测基因结合的原理。先将探针与染色体共同煮沸，使DNA双链中___键断裂，形成单链。随后在降温复性过程中，探针的碱基按照____________原则，与染色体上的特定基因序列形成较稳定的杂交分子。图中两条姐妹染色单体中最多可有_____条荧光标记的DNA片段。
(3)A、B、C分别代表不同的一个染色体组，已知AA和BB中各有一对同源染色体可被荧光探针标记。若植物甲(AABB)与植物乙(AACC)杂交，则其F₁有丝分裂中期的细胞中可观察到________个荧光点；在减数第一次分裂形成的两个子细胞中分别可观察到______个荧光点。

PCR技术扩增DNA,需要的条件是（）
①目的基因  ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等 ⑤mRNA  ⑥核糖体

A．①②③④

B．②③④⑤

C．①③④⑤

D．①②③⑥

水稻是我国最重要的粮食作物。稻瘟病是由稻瘟病菌（Mp）侵染水稻引起的病害，严重危害我国粮食生产安全。与使用农药相比，抗稻瘟病基因的利用是控制稻瘟病更加有效、安全和经济的措施。现有甲（R₁R₁r₂r₂r₃r₃）、乙（r₁r₁R₂R₂r₃r₃）、丙（r₁r₁r₂r₂R₃R₃）三个水稻抗病品种，抗病（R）对感病（r）为显性，三对抗病基因位于不同染色体上。根据基因的 DNA 序列设计特异性引物，用 PCR 方法可将样本中的 R₁、r₁、R₂、r₂、R₃、r₃ 区分开。这种方法可用于抗病品种选育中基因型的鉴定。并且研究发现，水稻的抗病表现不仅需要自身抗病基因（R₁、R₂、R₃等）编码的蛋白，也需要 Mp 基因（A₁、A₂、A₃等）编码的蛋白。只有 R 蛋白与相应的 A 蛋白结合，抗病反应才能被激活。

用甲品种与感病品种杂交后，对F₂不同植株的 R₁、r₁进行 PCR 扩增。已知 R₁比r₁ 片段短。如下为扩增结果。请分析选项中正确的是：

A．水稻种植区的 Mp 是由不同基因型组成的群体。大面积连续种植某个含不同抗病基因的水稻品种，将会引起 Mp 种群基因频率改变，使该品种抗病性逐渐减弱直至丧失，无法在生产中继续使用

B．为了在较短时间内将甲、乙、丙三个品种中的抗病基因整合，选育新的纯合抗病植株，育种步骤的正确排序是先将甲×乙，得到F1R1r1R2r2r3r3植株×丙，得到不同基因型的子代，再用 PCR 方法选出 R1R1R2R2R3R3植株

C．若基因型为 R1R1r2r2R3R3和 r1r1R2R2R3R3的水稻，被基因型为 a1a1A2A2a3a3的 Mp侵染，推测这两种水稻的抗病性表现依次为抗病、感病

D．研究人员每年用 Mp（A1A1a2a2a3a3）人工接种水稻品种甲（R1R1r2r2r3r3），几年后甲品种丧失了抗病性，检测水稻的基因未发现变异。推测甲品种抗病性丧失的原因是 Mp 的A1基因发生了突变。