下列过程中没有涉及碱基互补配对原则的是

A．提取目的基因

B．目的基因与运载体结合

C．将目的基因导入受体细胞

D．目的基因的表达和检测

科学家利用转基因技术培育了OsPHDI（水稻内原本也存在该基因>过量表达的水稻植株，以提高水稻的抗逆性（如抗干旱、抗高盐）。回答下列问题：
（l）为了验证OsPHDI基因的表达是否受逆境诱导，实验组需要给两叶期水稻设置_______条件，实验结果显示_______，说明OsPHDI基因的表达受逆境诱导。
（2）为了培育OsPHDI基因过量表达植株进行如下操作：
①利用PCR技术扩增获得大量OsPHDI基因，该操作的前提是_______。
②将OsPHDI基因与含有GFP（绿色荧光蛋白基因）的载体结合，此处GFP的作用是_______。
③常用_______法将表达载体导入水稻细胞；若受体细胞中出现绿色荧光，能否说明OsPHDI基因已成功导入受体细胞，并说出理由______________。
④最后利用_______技术培育出完整的抗逆性植株，该技术利用的生物学原理是______________

P53 基因是正常细胞内重要的抑癌基因，研究表明 P53 基因突变可导致肝脏细胞癌变。科学家研究发现 P53基因对体外培养的肝癌细胞生长有抑制作用，请回答下列问题：

（1）切下新鲜的肝癌组织，在 37℃下用_____消化 30～40 分钟，用培养液制成_____在培养箱中培养，在培养基中加入一定量的抗生素，其目的是_______________________。
（2）若P53 基因两侧的一段核苷酸序列是已知的，则获取P53 基因的方法通常是_____。
（3）将 P53 基因经过一系列的处理并与脂质体混合，将混合物滴加至肝癌细胞上，轻轻混匀。最后筛选出含有 P53 基因的肝癌细胞。脂质体在这个操作中的作用是_____。
（4）为证明P53 基因对肝癌细胞有抑制作用，需将两种细胞接入多孔板中，并从次日开始检测每孔的细胞总数，绘制成如图所示的生长曲线。请分析两条曲线分别是哪种细胞，曲线 1 是_____细胞，曲线 2 是_____细胞。

治疗侏儒症的唯一方法是向人体注射生长激素。过去生长激素的获得非常困难，需要从动物垂体中提取。而现在可利用基因工程，将人的生长激素基因导入大肠杆菌中，使其生产生长激素。人们从450L大肠杆菌培养液中提取的生长激素，相当于6万头动物的全部产量。图是该过程中重组质粒的构建和筛选过程。请回答下列问题：(Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Tetr为四环素抗性基因)

（1）EcoRⅠ在它识别序列的____________切开时，产生的是黏性末端。该过程中不能选用EcoRⅠ切割目的基因，原因是______________________。
（2）大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用__________处理细胞，使之成为感受态细胞。第二步将 _______与感受态细胞混合，在一定温度下完成转化过程。
（3）利用标记基因筛选重组质粒，将大肠杆菌分别在含有氨苄青霉素和四环素的培养基中培养，成功导入重组质粒的大肠杆菌生长情况是 __________。
（4）科学家现在将生长激素基因与____________等重组在一起，导入哺乳动物受精卵中，然后将受精卵送入经____________激素处理后的母体内，使其生长发育成转基因动物，这些动物乳腺生物反应器中即可表达出生长激素。为了获得同卵多胎的效果，可以使用___________技术。

CAR-T细胞疗法是通过设计CAR基因，并导入癌症患者的T细胞中，使其转化为CAR-T细胞，CAR-T细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后，激活CAR-T细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆，主要过程如下图。请回答：

(1)过程①中，需要先要用____切割不同的DNA片段形成黏性末端，再利用____连接形成CAR基因。
(2)将CAR基因导入患者T细胞前，必须先完成过程②，一是因为CAR基因片段小，在细胞中容易丟失;二是因为缺少____，CAR基因在T细胞中不能复制。
(3)完成过程③常用方法是____。此外，还可以先将CAR基因整合到逆转录病毒载体中，再利用病毒的____性导入并将CAR基因整合到T细胞的____上。
(4)根据图示，CAR-T细胞对癌细胞的特异性杀伤主要取决于CAR蛋白____区。CAR-T细胞疗法具有持久性是因为CAR-T细胞能够在体内____。