人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）

回答下列问题：
（1）己知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为____。
（2）若t-PA改良基因的粘性末端如图所示，那么需选用限制酶____和____切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接，在连接时需要用到___酶。
（3）应选择____（能／不能）在加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，目的是____。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈____色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
（4）以上制造性能优异的改良t-PA蛋白的过程称为____工程。

动物乳腺生物反应器的原理是基于转基因平台，将外源基因导入动物基因组中，并定位表达于动物乳腺，利用动物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力。下图为利用奶牛生产抗病毒的特效药—干扰素的基本流程。请回答下列问题。

（1）由干扰素mRNA形成cDNA的①过程称为____________，②过程可通过______________技术扩增获得大量干扰素基因。
（2）干扰素基因与乳腺蛋白基因的_____________等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的______________中。
（3）⑤过程表示的是体外受精，该过程主要包括____________、精子的获取和受精等步骤。在体外受精前要对精子进行_________处理，体外受精后，应将受精卵移入______培养液中继续培养。培养过程中，在培养液中添加一定量的_______________，以防止杂菌污染；该过程通常需要维持一定的CO₂浓度，CO₂的作用是____________。
（4）为同时获得多个完全相同的子代个体，可在⑦操作之前进行________________。若转基因牛的体细胞中只携带了一个干扰素基因，常采用______________的方法来培育出体细胞中含两个干扰素基因的纯合个体。

回答下列有关现代生物科技的问题：
（1）糖尿病在现代社会中的发病率越来越高，主要是由于患者胰岛B细胞受损，胰岛素分泌不足引起的。对此，某同学根据所学知识提出了用转基因动物生产胰岛素的治疗方法。
基本程序：①获取目的基因→②基因表达载体的构建→③将目的基因导入受体细胞→④目的基因的检测与鉴定。其中①和②的操作中需要用的相同的工具酶作用于______________键。利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在________酶的作用下延伸形成DNA。
（2）植物细胞工程中，科学家采用体细胞杂交方法终于获得“番茄—马铃薯”超级杂种植株，该过程中可诱导原生质体融合的物理方法有___________、__________和电激等，获得的杂种细胞还需经________________技术培养成杂种植株。
（3）动物细胞培养中，通常需要用_________________________处理动物组织块，使之分散成单个细胞；克隆动物的获得是利用了______________的全能性。

治疗侏儒症的唯一方法是向人体注射生长激素。过去生长激素的获得非常困难，需要从动物垂体中提取。而现在可利用基因工程，将人的生长激素基因导入大肠杆菌中，使其生产生长激素。人们从450L大肠杆菌培养液中提取的生长激素，相当于6万头动物的全部产量。图是该过程中重组质粒的构建和筛选过程。请回答下列问题：(Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Tetr为四环素抗性基因)

（1）EcoRⅠ在它识别序列的____________切开时，产生的是黏性末端。该过程中不能选用EcoRⅠ切割目的基因，原因是______________________。
（2）大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用__________处理细胞，使之成为感受态细胞。第二步将 _______与感受态细胞混合，在一定温度下完成转化过程。
（3）利用标记基因筛选重组质粒，将大肠杆菌分别在含有氨苄青霉素和四环素的培养基中培养，成功导入重组质粒的大肠杆菌生长情况是 __________。
（4）科学家现在将生长激素基因与____________等重组在一起，导入哺乳动物受精卵中，然后将受精卵送入经____________激素处理后的母体内，使其生长发育成转基因动物，这些动物乳腺生物反应器中即可表达出生长激素。为了获得同卵多胎的效果，可以使用___________技术。

资料一：PCR（聚合酶链式反应）三个基本反应步骤是模板DNA在体外加热至95℃时解旋成单链，温度降至55℃左右，引物与模板单链按碱基互补配对的原则结合，再调至72℃左右时，DNA聚合酶沿5′→3′（磷酸到五碳糖）的方向延伸引物合成互补链。三个步骤完成一次称为一个循环。
资料二：图1显示了目的基因及其上限制酶切点，A、B、C、D是四种单链DNA片段；图2是质粒（显示限制酶切点和标记基因），一般来说，为了使切割后的目的基因与运载体结合，往往使用两种限制酶，同时还要破坏载体上的一个标记基因。根据资料回答下列问题：

（1）若利用PCR技术增加目的基因的数量，所用的酶是__________。由图1可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取__________作为引物，该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生DNA片段__________个。
（2）为了提高目的基因和质粒的重组成功率，同时有利于受体细胞的筛选，应该选择的限制酶是________。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切割且每次机会相等，则形成的含有完整抗四环素基因的DNA片段有__________种。
（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是__________。
（4）对基因组文库的描述，不正确的是__________。

A．含有某种生物的全部基因	B．基因中含有启动子和内含子
C．文库的基因是通过受体菌承载的	D．文库中的全部基因可以在物种间交流