1978年，人类首次利用转基因技术生产出人胰岛素，其过程大致如图所示：

（1）人胰岛素由A、B两条肽链组成，可根据组成肽链的氨基酸序列，确定编码胰岛素基因的碱基序列，因此可通过____________方法获得目的基因。
（2）β- 半乳糖苷酶能将无色ONPG分解，产物呈黄色，本生产流程中β- 半乳糖苷酶基因作为___________，通过①和②，完成基因表达载体的构建，写出该过程处理DNA分子所需要的酶：________________________________。
（3）③表示将表达载体导入受体细胞，用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是使之变为____________细胞，利于外源DNA侵染，④表示利用化学方法催化二硫键的形成，合成具有生物活性的胰岛素，人体内该过程在胰岛B细胞的_________中进行。

科研人员通过PCR获得肝细胞特异性启动子——白蛋白启动子，将该启动子与Cre重组酶基因结合构建表达载体，培育出在肝细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠。下列叙述正确的是

A．将该表达载体导入肝细胞以获得转基因小鼠

B．PCR获得白蛋白启动子需设计特异性的引物

C．构建该表达载体需要限制酶和DNA聚合酶

D．通过核酸分子杂交技术检测目的基因是否完成表达

某基因研究院培育出了转基因克隆绵羊，该绵羊能合成深海鱼体内富含的不饱和脂肪酸omega—3。
（1）在培育转基因克隆绵羊过程中，运用_________方法除去的卵母细胞的细胞核，通过化学试剂______使该细胞与供体细胞融合，进而构建重组胚胎。
（2）为保证胚胎移植顺利进行，需要在合适的季节对供、受体母羊进行__________处理，培育过程中，科研人员同时将omega—3合成酶的基因片段转移到了该羊基因组中，使目的基因进入受体细胞并维持稳定和表达的过程，称为_________。利用PCR技术进行扩增目的基因的前提是______________。
（3）目前，人们主要通过食用深海鱼肉摄取omega—3，人们过度捕杀深海鱼而严重破坏了海洋生态系统，使生态系统的__________稳定性下降。
（4）建造海底人工鱼礁，其目的是改善海洋环境，是实现海洋渔业可持续发展的举措之一，这体现了生态工程所遵循的________原理。十九大提出“绿水青山就是金山银山”，要实现这一目标不仅需要对破坏的生态环境进行恢复，还要考虑当地人的经济发展和生活需要，这主要遵循了生态工程的_________原理。

回答下列有关现代生物科技的问题：
（1）糖尿病在现代社会中的发病率越来越高，主要是由于患者胰岛B细胞受损，胰岛素分泌不足引起的。对此，某同学根据所学知识提出了用转基因动物生产胰岛素的治疗方法。
基本程序：①获取目的基因→②基因表达载体的构建→③将目的基因导入受体细胞→④目的基因的检测与鉴定。其中①和②的操作中需要用的相同的工具酶作用于______________键。利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在________酶的作用下延伸形成DNA。
（2）植物细胞工程中，科学家采用体细胞杂交方法终于获得“番茄—马铃薯”超级杂种植株，该过程中可诱导原生质体融合的物理方法有___________、__________和电激等，获得的杂种细胞还需经________________技术培养成杂种植株。
（3）动物细胞培养中，通常需要用_________________________处理动物组织块，使之分散成单个细胞；克隆动物的获得是利用了______________的全能性。

前不久，某生物公司的百白破疫苗检验不符合规定。为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序，科学家研制出基因工程乙肝－百白破（rHB－DTP）四联疫苗，经各项检测均通过 rHB－DTP四联疫苗制检规程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风杆菌的四种类毒素。请分析回答：
（1）为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应mRNA，在______的作用下合成双链 cDNA片段，获得的 cDNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列_____（填“相同”或“不同”）。
（2）由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小，且序列已知，获得目的基因可采用________，然后通过 PCR技术大量扩增____________，此技术的前提是已知一段____________的核苷酸序列以便合成。
（3）把目的基因导入受体细胞时，科学家采用了改造后的腺病毒作为载体，写出你认为科学家选它的理由_________________________________________________。（写出 2点）
（4）研究发现，如果将白喉杆菌类毒素 20位和 24位的氨基酸改变为半胱氨酸，免疫效果更好，请写出此种技术的基本流程_____________。
（5）实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗 3次效果更好，其主要原因是体内产生的_____细胞数量增多，当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是_____。