从人的胰岛B细胞中提取出总RNA，经逆转录后得到cDNA，以cDNA为模板，利用PCR扩增目的基因，无法得到的是（   ）

A．胰岛素基因	B．呼吸酶基因
C．RNA聚合酶基因	D．生长激素基因

科研人员通过PCR获得肝细胞特异性启动子——白蛋白启动子，将该启动子与Cre重组酶基因结合构建表达载体，培育出在肝细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠。下列叙述正确的是

A．将该表达载体导入肝细胞以获得转基因小鼠

B．PCR获得白蛋白启动子需设计特异性的引物

C．构建该表达载体需要限制酶和DNA聚合酶

D．通过核酸分子杂交技术检测目的基因是否完成表达

利用现代生物技术可对生物进行改造。例如：
①从某细菌中获取抗虫基因，并与质粒运载体拼接成重组DNA，导入棉花的愈伤组织细胞内，经培养、筛选和培育获得抗虫棉品种；
②将人胰岛素基因与质粒运载体才并接成重组DNA，再导入某种细菌细胞内，大量培养该种细菌，以生产医用的人胰岛素；
③取某种植物花粉，先组织培养形成完整桂林，再用秋水仙素处理，使之染色体加倍；
④将大鼠的生长激素基因与质粒运载体拼接成重组DNA，注射入小鼠的受精卵内，体外培养该受精卵使之发育到一定的胚胎阶段后，移植入代孕小鼠体内，产生“超级小鼠”； 
⑤取转基因抗冻番茄叶片经组织培养，产生再生植株，达到快速繁殖抗冻番茄的目的。根据上述材料回答问题。
【小题1】上述例子中，用到基因工程技术的有____________（填序号）。目的基因除了人工合成外，
还可通过________方法获取，拼接重组DNA的步骤中，都需要用到限制性内切酶和____________酶。
【小题2】与杂交的方法相比用例③中方法得到纯合子所需时间____________（较短/较长/相同）；用例⑤中所用方法大量去繁殖抗冻番茄时，抗冻基因____（更容易/不容易/一样容易）丢失。
【小题3】上述例子中，需要用到植物组织培养技术的有____________（填序号），植物组织培养技术的基本原理是植物活细胞具有______。

前不久，某生物公司的百白破疫苗检验不符合规定。为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序，科学家研制出基因工程乙肝－百白破（rHB－DTP）四联疫苗，经各项检测均通过 rHB－DTP四联疫苗制检规程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风杆菌的四种类毒素。请分析回答：
（1）为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应mRNA，在______的作用下合成双链 cDNA片段，获得的 cDNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列_____（填“相同”或“不同”）。
（2）由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小，且序列已知，获得目的基因可采用________，然后通过 PCR技术大量扩增____________，此技术的前提是已知一段____________的核苷酸序列以便合成。
（3）把目的基因导入受体细胞时，科学家采用了改造后的腺病毒作为载体，写出你认为科学家选它的理由_________________________________________________。（写出 2点）
（4）研究发现，如果将白喉杆菌类毒素 20位和 24位的氨基酸改变为半胱氨酸，免疫效果更好，请写出此种技术的基本流程_____________。
（5）实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗 3次效果更好，其主要原因是体内产生的_____细胞数量增多，当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是_____。

动物乳腺生物反应器的原理是基于转基因平台，将外源基因导入动物基因组中，并定位表达于动物乳腺，利用动物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力。下图为利用奶牛生产抗病毒的特效药—干扰素的基本流程。请回答下列问题。

（1）由干扰素mRNA形成cDNA的①过程称为____________，②过程可通过______________技术扩增获得大量干扰素基因。
（2）干扰素基因与乳腺蛋白基因的_____________等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的______________中。
（3）⑤过程表示的是体外受精，该过程主要包括____________、精子的获取和受精等步骤。在体外受精前要对精子进行_________处理，体外受精后，应将受精卵移入______培养液中继续培养。培养过程中，在培养液中添加一定量的_______________，以防止杂菌污染；该过程通常需要维持一定的CO₂浓度，CO₂的作用是____________。
（4）为同时获得多个完全相同的子代个体，可在⑦操作之前进行________________。若转基因牛的体细胞中只携带了一个干扰素基因，常采用______________的方法来培育出体细胞中含两个干扰素基因的纯合个体。