前不久，某生物公司的百白破疫苗检验不符合规定。为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序，科学家研制出基因工程乙肝－百白破（rHB－DTP）四联疫苗，经各项检测均通过 rHB－DTP四联疫苗制检规程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风杆菌的四种类毒素。请分析回答：
（1）为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应mRNA，在______的作用下合成双链 cDNA片段，获得的 cDNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列_____（填“相同”或“不同”）。
（2）由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小，且序列已知，获得目的基因可采用________，然后通过 PCR技术大量扩增____________，此技术的前提是已知一段____________的核苷酸序列以便合成。
（3）把目的基因导入受体细胞时，科学家采用了改造后的腺病毒作为载体，写出你认为科学家选它的理由_________________________________________________。（写出 2点）
（4）研究发现，如果将白喉杆菌类毒素 20位和 24位的氨基酸改变为半胱氨酸，免疫效果更好，请写出此种技术的基本流程_____________。
（5）实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗 3次效果更好，其主要原因是体内产生的_____细胞数量增多，当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是_____。

英国的科学家利用转基因技术培育出含有大鼠生长激素基因的巨型小鼠，如图是制备转基因小鼠的操作过程。图中编号表示过程，A～D表示限制酶，字母下方的斜线指向的是相应的酶切位点。

【小题1】图中过程① 需要用到的限制酶是___________ 和___________；过程②所用到的酶是___________。
【小题2】图中过程③ 所用方法是___________，受体细胞一般采用___________细胞。得到巨型小鼠后，可取其体细胞核，采用___________进行繁育。
【小题3】从转基因生物的安全性方面考虑，上述转基因小鼠研究必须在限定范围内进行，这一做法的目的是防止____________基因向其他生物扩散。

人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）

回答下列问题：
（1）己知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为____。
（2）若t-PA改良基因的粘性末端如图所示，那么需选用限制酶____和____切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接，在连接时需要用到___酶。
（3）应选择____（能／不能）在加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，目的是____。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈____色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
（4）以上制造性能优异的改良t-PA蛋白的过程称为____工程。

某植物蛋白酶抑制剂Ⅱ基因是重要的抗虫基因，该基因转录的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因，具体原理如下图所示，其中①〜③表示有关过程，Ⅰ〜Ⅲ表示有关物质。请回答下列问题：

（1）过程①反应体系中，需要加入__________种引物，还需加入__________酶，生成杂合链物质Ⅰ。
（2）利用DNA末段转移酶催化过程②，使cDNA单链左侧末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列（AAA(A)_n），其目的是_________________，进而利于过程③扩增获得目的基因序列Ⅲ，过程③反应体系需要添加的新引物序列是____________________。
（3）与物质Ⅲ相比，物质Ⅰ化学组成不同的是____________________。与过程③相比，过程①中碱某配对方式的不同之处是__________。
（4）在物质Ⅲ的两端通常还需要增加__________序列，以便与相应的载体重组，再利用__________处理大肠杆菌等，以利于将重组质粒导入细胞，构建cDNA文库。

科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程出Rubisco酶对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。下列叙述错误的是（   ）

A．PCR定点突变技术使Rubisco酶基因发生定向突变

B．PCR技术扩增目基因的过程中必须添加两种引物

C．PCR扩增过程需加入解旋酶和热稳定DNA聚合酶

D．PCR定点突变技术属于蛋白质工程的范畴