研究人员将鱼的抗冻基因导入番茄体内，获得抗冻能力明显提高的番茄新品种。下列操作合理的是

A．设计相应DNA单链片段作为引物，利用PCR技术扩增目的基因

B．利用限制性核酸内切酶和DNA聚合酶构建基因表达载体

C．将基因表达载体导入番茄体细胞之前需用Ca2+处理细胞

D．运用DNA分子杂交技术检测抗冻基因是否在番茄细胞中表达

CAR-T细胞疗法是通过设计CAR基因，并导入癌症患者的T细胞中，使其转化为CAR-T细胞，CAR-T细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后，激活CAR-T细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆，主要过程如下图。请回答：

(1)过程①中，需要先要用____切割不同的DNA片段形成黏性末端，再利用____连接形成CAR基因。
(2)将CAR基因导入患者T细胞前，必须先完成过程②，一是因为CAR基因片段小，在细胞中容易丟失;二是因为缺少____，CAR基因在T细胞中不能复制。
(3)完成过程③常用方法是____。此外，还可以先将CAR基因整合到逆转录病毒载体中，再利用病毒的____性导入并将CAR基因整合到T细胞的____上。
(4)根据图示，CAR-T细胞对癌细胞的特异性杀伤主要取决于CAR蛋白____区。CAR-T细胞疗法具有持久性是因为CAR-T细胞能够在体内____。

前不久，某生物公司的百白破疫苗检验不符合规定。为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序，科学家研制出基因工程乙肝－百白破（rHB－DTP）四联疫苗，经各项检测均通过 rHB－DTP四联疫苗制检规程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风杆菌的四种类毒素。请分析回答：
（1）为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应mRNA，在______的作用下合成双链 cDNA片段，获得的 cDNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列_____（填“相同”或“不同”）。
（2）由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小，且序列已知，获得目的基因可采用________，然后通过 PCR技术大量扩增____________，此技术的前提是已知一段____________的核苷酸序列以便合成。
（3）把目的基因导入受体细胞时，科学家采用了改造后的腺病毒作为载体，写出你认为科学家选它的理由_________________________________________________。（写出 2点）
（4）研究发现，如果将白喉杆菌类毒素 20位和 24位的氨基酸改变为半胱氨酸，免疫效果更好，请写出此种技术的基本流程_____________。
（5）实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗 3次效果更好，其主要原因是体内产生的_____细胞数量增多，当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是_____。

1978年，人类首次利用转基因技术生产出人胰岛素，其过程大致如图所示：

（1）人胰岛素由A、B两条肽链组成，可根据组成肽链的氨基酸序列，确定编码胰岛素基因的碱基序列，因此可通过____________方法获得目的基因。
（2）β- 半乳糖苷酶能将无色ONPG分解，产物呈黄色，本生产流程中β- 半乳糖苷酶基因作为___________，通过①和②，完成基因表达载体的构建，写出该过程处理DNA分子所需要的酶：________________________________。
（3）③表示将表达载体导入受体细胞，用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是使之变为____________细胞，利于外源DNA侵染，④表示利用化学方法催化二硫键的形成，合成具有生物活性的胰岛素，人体内该过程在胰岛B细胞的_________中进行。

下列关于基因工程的叙述，错误的是

A．cDNA文库中的基因可以进行物种间的基因交流

B．转基因棉花是否具抗虫特性可通过检测棉花对某种害虫的抗性来确定

C．外源DNA必须位于重组质粒的起始密码和终止密码之间才能进行表达

D．抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物，从而造成基因污染