某植物蛋白酶抑制剂Ⅱ基因是重要的抗虫基因，该基因转录的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因，具体原理如下图所示，其中①〜③表示有关过程，Ⅰ〜Ⅲ表示有关物质。请回答下列问题：

（1）过程①反应体系中，需要加入_________ 种引物，还需加入_________ 酶，生成杂合链物质Ⅰ。
（2）利用DNA末段转移酶催化过程②，使cDNA单链左侧末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列（AAA(A)n），其目的是_________________，进而利于过程③扩增获得目的基因序列Ⅲ，过程③反应体系需要添加的新引物序列是____________________ 。该过程需_________酶。
（3）与物质Ⅲ相比，物质Ⅰ化学组成不同的是____________________。
（4）在物质Ⅲ的两端通常还需要增加______________ 序列，以便与相应的载体重组，再利用 ________ 处理大肠杆菌等，以利于将重组质粒导入细胞，构建cDNA文库。

根据材料回答问题：
材料一：科学家研究发现新型冠状病毒S蛋白(Spike protein，刺突蛋白)可与宿主细胞的病毒受体结合，是决定病毒入侵易感细胞的关键蛋白。
（1）以S蛋白作为______ 可制备单克隆抗体生产快速检测新冠病毒的试剂盒。单克隆抗体制备过程中有两次筛选，第一次筛选的目的是得到______________________的杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞还需进行_____________________________________，经过多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
材料二：新型冠状病毒核酸检测采用荧光定量PCR仪，通过检测荧光信号的累积（以Ct值表示）来确定样本中是否有病毒核酸。新冠病毒的遗传物质为RNA，科学家先将病毒RNA逆转录，再将得到的cDNA进行多聚酶链式反应扩增得到了大量DNA片段（如图所示）。

（2）在上述技术中，用到的酶有_______________________________（至少写出两种）。
（3）科学家已测出新冠病毒的核酸序列，据图分析，Ⅰ、Ⅱ过程需要根据病毒的核苷酸序列设计__________。过程Ⅱ中以cDNA为模板经过_____________________三步循环扩增得到多个DNA片段，第____次复制后就能获得两条链等长的DNA序列。
（4）采集新冠肺炎疑似患者的咽部细胞样本提取核酸进行上述PCR过程，每一个扩增出来的DNA序列，都可与预先加入的一段荧光标记探针结合，产生荧光信号，扩增出来的靶基因越多，观察到的 Ct值就越_____________。

以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图。据图分析，下列说法正确的是（ ）

A．催化①过程的酶是RNA聚合酶

B．④过程发生的变化是引物与单链DNA结合

C．催化②⑤过程的酶都是耐高温的DNA聚合酶

D．③过程需要高温和ATP供能才能完成

利用PCR技术扩增DNA片段（基因），需要的条件有（   ）
①目的基因  ②mRNA  ③四种核糖核苷酸  ④四种脱氧核苷酸  ⑤氨基酸  ⑥ATP  ⑦耐高温的DNA聚合酶  ⑧核糖体   ⑨引物

A．②③⑥⑦⑨	B．①④⑥⑦⑨
C．①④⑦⑨	D．②⑤⑥⑧

PCR一般要经过三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时 ( )。

A．仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸

B．与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸

C．同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链的延伸

D．无需与引物结合，在酶的作用下从头合成子链