通过设计引物，运用PCR技术可以实现目的基因的定点诱变。如图为基因工程中获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中引物1和引物2的5'端分别设计增加限制酶a和限制酶b的识别位点。有关叙述不正确的是（　　）

A．引物中设计两种限制酶识别位点有利于目的基因定向插入

B．在PCR反应体系中还需要加入4种游离核苷酸、Taq酶等

C．第3轮PCR，引物1能与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因

D．第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA占1/2

油菜素内酯（BR）可提高水稻对真菌（细胞壁成分为几丁质）的抗性。为研究其分子机制，科研工作者用BR对水稻进行了处理，并检测了实验组和对照组水稻叶片几丁质酶的活性，结果如图1所示；同时提取了实验组和对照组水稻细胞中总RNA进行反转录，并对其产物进行PCR后电泳处理，结果如图2所示（18S为参照）。据图分析，下列说法不正确的是

A．BR可以提高水稻体内几丁质酶的活性

B．BR可以提高水稻细胞中几丁质酶基因的转录水平

C．BR可以提高水稻对真菌细胞壁的水解作用

D．BR可增加水稻细胞中18S基因的表达量

萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。

（1）研究者用相同的________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。
（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。
①这是利用PCR技术实现了定点的________。
②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。

	引物A	引物B	引物C	引物D
PCR1
PCR2
PCR3
PCR4

 
________
（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是________________。

PCR技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行研究的问题，而被广泛应用，此过程需要一种Taq DNA聚合酶。请回答有关问题：
（1）体内DNA复制过程中用解旋酶打开双链DNA，而PCR技术中应用________________。
（2）Taq DNA聚合酶是从水生耐热细菌Taq中分离的。
①Taq DNA聚合酶的功能是_________________________________。
②Taq DNA聚合酶的化学本质为蛋白质，可用______________法和_____________法进行分离。
（3）相对于细菌分离，DNA分子的分离和提取操作要复杂的多。
①在DNA提取中两次用到蒸馏水，其目的分别是________________________、_________________________________。
②实验中能否以哺乳动物成熟的红细胞为实验材料？__________________________为什么？______________________________________________________。
（4）PCR中加入的引物有_________种，加入引物的作用是_______________________________。

根据某基因上游和下游的碱基序列，设计合成了用于该基因PCR的两段引物（单链DNA）。引物与该基因变性DNA（单链DNA）结合为双链DNA的过程称为复性。如图是两引物的T_m（引物熔解温度，即50%的引物与其互补序列形成双链DNA分子时的温度）测定结果，下列叙述正确的是（   ）

A．通常引物1和引物2不能有碱基互补配对关系

B．两引物分别是子链延伸的起点，并可以反复利用

C．若两引物的脱氧核苷酸数相同，推测引物2的G—C含量较高

D．复性所需温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度等因素