通过设计引物，运用PCR技术可以实现目的基因的定点诱变。如图为基因工程中获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中引物1和引物2的5'端分别设计增加限制酶a和限制酶b的识别位点。有关叙述不正确的是（　　）

A．引物中设计两种限制酶识别位点有利于目的基因定向插入

B．在PCR反应体系中还需要加入4种游离核苷酸、Taq酶等

C．第3轮PCR，引物1能与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因

D．第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA占1/2

水稻是我国最重要的粮食作物。稻瘟病是由稻瘟病菌（Mp）侵染水稻引起的病害，严重危害我国粮食生产安全。与使用农药相比，抗稻瘟病基因的利用是控制稻瘟病更加有效、安全和经济的措施。现有甲（R₁R₁r₂r₂r₃r₃）、乙（r₁r₁R₂R₂r₃r₃）、丙（r₁r₁r₂r₂R₃R₃）三个水稻抗病品种，抗病（R）对感病（r）为显性，三对抗病基因位于不同染色体上。根据基因的 DNA 序列设计特异性引物，用 PCR 方法可将样本中的 R₁、r₁、R₂、r₂、R₃、r₃ 区分开。这种方法可用于抗病品种选育中基因型的鉴定。并且研究发现，水稻的抗病表现不仅需要自身抗病基因（R₁、R₂、R₃等）编码的蛋白，也需要 Mp 基因（A₁、A₂、A₃等）编码的蛋白。只有 R 蛋白与相应的 A 蛋白结合，抗病反应才能被激活。

用甲品种与感病品种杂交后，对F₂不同植株的 R₁、r₁进行 PCR 扩增。已知 R₁比r₁ 片段短。如下为扩增结果。请分析选项中正确的是：

A．水稻种植区的 Mp 是由不同基因型组成的群体。大面积连续种植某个含不同抗病基因的水稻品种，将会引起 Mp 种群基因频率改变，使该品种抗病性逐渐减弱直至丧失，无法在生产中继续使用

B．为了在较短时间内将甲、乙、丙三个品种中的抗病基因整合，选育新的纯合抗病植株，育种步骤的正确排序是先将甲×乙，得到F1R1r1R2r2r3r3植株×丙，得到不同基因型的子代，再用 PCR 方法选出 R1R1R2R2R3R3植株

C．若基因型为 R1R1r2r2R3R3和 r1r1R2R2R3R3的水稻，被基因型为 a1a1A2A2a3a3的 Mp侵染，推测这两种水稻的抗病性表现依次为抗病、感病

D．研究人员每年用 Mp（A1A1a2a2a3a3）人工接种水稻品种甲（R1R1r2r2r3r3），几年后甲品种丧失了抗病性，检测水稻的基因未发现变异。推测甲品种抗病性丧失的原因是 Mp 的A1基因发生了突变。

某植物蛋白酶抑制剂Ⅱ基因是重要的抗虫基因，该基因转录的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因，具体原理如下图所示，其中①〜③表示有关过程，Ⅰ〜Ⅲ表示有关物质。请回答下列问题：

（1）过程①反应体系中，需要加入_________ 种引物，还需加入_________ 酶，生成杂合链物质Ⅰ。
（2）利用DNA末段转移酶催化过程②，使cDNA单链左侧末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列（AAA(A)n），其目的是_________________，进而利于过程③扩增获得目的基因序列Ⅲ，过程③反应体系需要添加的新引物序列是____________________ 。该过程需_________酶。
（3）与物质Ⅲ相比，物质Ⅰ化学组成不同的是____________________。
（4）在物质Ⅲ的两端通常还需要增加______________ 序列，以便与相应的载体重组，再利用 ________ 处理大肠杆菌等，以利于将重组质粒导入细胞，构建cDNA文库。

乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白，免疫接种实验表明这两种蛋白质都可引起实验动物的免疫反应。科研人员用农杆菌转化法培育出转基因番茄，用于生产可口服的乙肝病毒疫苗，回答下列问题：

（1）T1蛋白和T2蛋白进入实验动物的肠道后，会被实验动物小肠黏膜上的一种M细胞当做_________处理，进而引发一系列的免疫反应，最终产生相应的_________________，使实验动物获得了对乙肝病毒的免疫能力。
（2）用转基因番茄生产可口服的乙肝病毒疫苗（含T1蛋白），所用的目的基因是____________，所用的运载体是土壤农杆菌的________________。
（3）可利用PCR技术扩增目的基因，其前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成_________。PCR一般要经历三十多次循环，目的基因在乙肝病毒DNA中的位置如图所示，则在____________（填“第一次”、“第二次”或“第三次”）次循环结束后，即可出现两条链等长的目的基因片断。 
（4）获得转基因番茄植株后，通过分子检测，已确定该植株所结番茄中含有T2蛋白，此后还需要进行个体生物学水平的鉴定，例如___________________________________。