人 t-PA 蛋白能高效溶解血纤维蛋白凝聚的血栓。用传统基因工程生产的t-PA给心梗患者大剂量注射却会诱发颅内出血，原因在于其与血纤维蛋白结合的特异性低，但若将其第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，就能显著降低出血副作用。据此，科学家对人t-PA 基因进行序列改造，再采取传统的基因工程方法表达该突变基因，制造出了高性能的t-PA 突变蛋白。

（1）人 t-PA 基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA。丝氨酸的密码子为UCU，突变基因中对应该氨基酸密码子的碱基序列应设计为______。
（2）上述获得突变目的基因的基本途径是___。
（3）如图所示 t-PA 突变基因、质粒，用__________限制酶切开该质粒较好。
（4）将相应的重组质粒导入大肠杆菌中，含 t-PA 突变基因的细胞应具有的性状是______。
（5）上述生物工程技术是以_______为基础的，首先通过________，再进行______，以满足医疗需求的。

2012年诺贝尔生理学或医学奖颁给了在细胞核重新编程领域有杰出贡献的两位科学家。科学家把c—Myc等4个关键基因通过逆转录病毒转入小鼠的成纤维细胞，使其变成未成熟的细胞—诱导多能干细胞即iPS细胞，而未成熟的细胞能够发育成机体内所有类型的细胞。
（1）题中的逆转录病毒相当于基因工程基本工具中的________；构建基因表达载体时对核苷酸序列有严格要求的工具酶是___________。
（2）目的基因进入受体细胞内，并且在其内维持稳定和表达的过程称为______________。基因工程技术所依据的原理是_________。
（3）若想增强病毒颗粒的感染性，可利用________________方法改造病毒外壳蛋白的结构，并最终通过对_______进行操作来完成。
（4）在培养过程中，要将成纤维细胞置于5%CO₂的气体环境中，CO₂的作用是_______________________________。
（5）iPS细胞在功能上类似于胚胎干细胞，则其在功能上的特点是______________________。iPS细胞的获得不使用胚胎细胞或卵细胞，也不诱导发育成个体，因此不会像生殖性克隆一样引发_____________问题。

人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）

回答下列问题：
（1）己知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为____。
（2）若t-PA改良基因的粘性末端如图所示，那么需选用限制酶____和____切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接，在连接时需要用到___酶。
（3）应选择____（能／不能）在加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，目的是____。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈____色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
（4）以上制造性能优异的改良t-PA蛋白的过程称为____工程。

科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程出Rubisco酶对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。下列叙述错误的是（   ）

A．PCR定点突变技术使Rubisco酶基因发生定向突变

B．PCR技术扩增目基因的过程中必须添加两种引物

C．PCR扩增过程需加入解旋酶和热稳定DNA聚合酶

D．PCR定点突变技术属于蛋白质工程的范畴

下列关于蛋白质工程说法，错误的是

A．蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的二代基因工程

B．实施蛋白质工程的基本途径必须从预期蛋白质功能出发

C．蛋白质工程实施过程中可对关键氨基酸直接置换或增删

D．构建基因表达载体也是蛋白质工程的核心步骤