科学家通过基因工程，成功利用非转基因棉A植株培育出抗虫转基因棉B植株，其过程如下图所示。

回答下列问题：
（1）获取抗虫转基因棉B植株的操作程序主要包括四个步骤，其中核心步骤是____。启动子是一段特殊结构的DNA片段，它是____识别和结合的部位。
（2）研究人员发明了一种新的基因转化法——农杆菌介导喷花转基因法，即将农杆菌悬浮液用微型喷壶均匀喷洒于棉花柱头和花药等器官上，该方法集合了农杆菌转化法和___ 两种转化法的优点。结合上图，分析其与农杆菌转化法相比，具有的优势是________。
（3）通过对Bt蛋白质三维结构图及氨基酸序列进行分析，发现若将该蛋白质结构中一段由14个氨基酸组成的螺旋结构缺失，结构变化后的Bt蛋白质能使棉铃虫具有更高的致死率。若要根据蛋白质工程的原理设计实验对Bt蛋白进行改造，以提高其致死率，实验设计思路是____。
（4）若要确认该改造的Bt基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的____，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的____是否得到提高。

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种动物传染病，目前常用接种弱毒疫苗的方法预防。疫苗的主要成分是该病毒的一种结构蛋白VP1。科学家尝试利用转基因番茄来生产口蹄疫疫苗。请回答下列问题：

（1）口蹄疫病毒的遗传物质为RNA，则获得可重组到质粒的VP1基因必须用到__________酶。要获得大量该VP1基因，可利用__________技术进行扩增。
（2）如图是VP1基因、农杆菌Ti质粒结构示意图，若用以构建具有VP1基因的基因表达载体，还需要在质粒中插入__________。
（3）VP1基因应插入到农杆菌Ti质粒的__________上，通过__________作用进入番茄细胞并插入到染色体DNA，使VP1基因能够稳定存在并发挥作用。
（4）通常用BamHⅠ、HindⅢ两种限制酶切割VP1基因和Ti质粒的目的是__________，要筛选出含有该目的基因表达载体的农杆菌，首先需要在含__________的培养基上进行。
（5）检测发现染色体DNA上插入VP1基因的某些番茄细胞死亡了，导致这些转基因番茄细胞死亡的最可能原因是__________。
（6）将成功转入VP1基因的受体细胞进行培养，获得转基因植株。若要快速繁殖大量这种转基因种苗，应选取幼枝的__________部位进行组织培养。
（7）获得表达VP1蛋白的番茄植株以后，要进行免疫效力的测定，具体方法是：将从转基因番茄叶片中提取的VP1蛋白质注射到一定数量的豚鼠体内，每半个月注射一次，三次注射后检测豚鼠血液中产生的____数量，为了使结果可信，应设置空白对照组，注射__________。

在乙肝病毒（HBV）的结构蛋白中，与疫苗有关的主要是HBSAg蛋白，HBSAg基因已在不同的生物体系中成功表达。如图表示研究人员用农杆菌转化法培育出转基因番茄的过程，用于生产可口服的乙肝病毒疫苗，根据所学知识回答下列问题：

（1）可利用PCR技术扩增HBSAg基因片段，其前提是__________________，以便根据这一序列合成引物。扩增过程中应选择下图中的引物_________（填字母）与HBsAg基因片段结合。

（2）由上图可知，过程①用到的限制酶是_________，在培养农杆菌的培养基中添加__________可筛选得到含重组质粒的农杆菌。
（3）将含有HBSAg基因的农杆菌导入番茄细胞时，受损的番茄组织更有利于农杆菌的侵染，其原因是______________________________，HBSAg基因在番茄植株中遗传信息传递的一般规律为___________________（用流程图表示）。
（4）转基因番茄的细胞具有全能性，在一定的_____________以及无菌、适宜的pH和温度等条件下，可以形成愈伤组织，再进一步发育形成试管苗。过程④的实质是__________________。用该植株结出的番茄果实饲喂小鼠，若在小鼠的血清中检测到__________________，则说明转基因疫苗口服有效。

真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A(有内含子）可以表达出某种特定蛋白(简称蛋白A)。回答下列问题：
（1）某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是__________。
（2）若用家蚕作为表达基因A的载体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用_______作为载体，其原因是_________。
（3）若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体，因为与家蚕相比，大肠杆菌具有________(答出两点即可)等优点。
（4）若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是________(填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗体”）。
（5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是______________。

研究发现，从锥形蜗牛体内提取出的锥形蜗牛毒蛋白（Con-Ins GI）能加速受体细胞信号转换，比人类胰岛素更加快速的发挥作用，因此制造这类“速效胰岛素”以及利用转基因技术实现批量生产为Ⅰ型号糖尿病治疗的新思路。
（1）利用基因工程制造速效胰岛素过程中，构建的基因表达载体一般包括目的基因、启动子、______、标记基因和复制原点，标记基因的作用是___________________________。
（2）为了获得目的基因，可以通过提取分析毒蛋白中的_________序列推知毒蛋白基因的核苷酸序列，再用DNA合成仪直接合成。基因工程中需要DNA连接酶，根据酶的不同分为两类，其中“缝合”双链DNA片段平末端的是______________________。
（3）将人工合成的目的基因导入大肠杆菌体内，一般先用_______处理大肠杆菌使之成为_________细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于_________中与该类细胞混合，在一定温度下促进细胞吸收DNA分子完成转化过程。
（4）经过目的基因的检测和表达，获得Con-Ins GI毒蛋白活性未能达到期待的“速效胰岛素”的生物活性，导致这种差异的原因可能是_______________________________________________________。