1978年，人类首次利用转基因技术生产出人胰岛素，其过程大致如图所示：

（1）人胰岛素由A、B两条肽链组成，可根据组成肽链的氨基酸序列，确定编码胰岛素基因的碱基序列，因此可通过____________方法获得目的基因。
（2）β- 半乳糖苷酶能将无色ONPG分解，产物呈黄色，本生产流程中β- 半乳糖苷酶基因作为___________，通过①和②，完成基因表达载体的构建，写出该过程处理DNA分子所需要的酶：________________________________。
（3）③表示将表达载体导入受体细胞，用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是使之变为____________细胞，利于外源DNA侵染，④表示利用化学方法催化二硫键的形成，合成具有生物活性的胰岛素，人体内该过程在胰岛B细胞的_________中进行。

人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）

回答下列问题：
（1）己知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为____。
（2）若t-PA改良基因的粘性末端如图所示，那么需选用限制酶____和____切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接，在连接时需要用到___酶。
（3）应选择____（能／不能）在加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，目的是____。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈____色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
（4）以上制造性能优异的改良t-PA蛋白的过程称为____工程。

科学家通过基因工程，成功利用非转基因棉A植株培育出抗虫转基因棉B植株，其过程如下图所示。

回答下列问题：
（1）获取抗虫转基因棉B植株的操作程序主要包括四个步骤，其中核心步骤是____。启动子是一段特殊结构的DNA片段，它是____识别和结合的部位。
（2）研究人员发明了一种新的基因转化法——农杆菌介导喷花转基因法，即将农杆菌悬浮液用微型喷壶均匀喷洒于棉花柱头和花药等器官上，该方法集合了农杆菌转化法和___ 两种转化法的优点。结合上图，分析其与农杆菌转化法相比，具有的优势是________。
（3）通过对Bt蛋白质三维结构图及氨基酸序列进行分析，发现若将该蛋白质结构中一段由14个氨基酸组成的螺旋结构缺失，结构变化后的Bt蛋白质能使棉铃虫具有更高的致死率。若要根据蛋白质工程的原理设计实验对Bt蛋白进行改造，以提高其致死率，实验设计思路是____。
（4）若要确认该改造的Bt基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的____，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的____是否得到提高。

常见的酿酒酵母能利用葡萄糖，不能利用木糖发酵。若用转基因技术将发酵木糖的关键基因——木糖还原酶（XYL1）或木糖异构酶基因（XYLA）转入酿酒酵母中，均能培育出能利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母。图表示XYL1基因与细菌pYMILP质粒重组的过程示意图。图中AMP^r是氨苄青霉素抗性基因，其基因产物可使“碘—淀粉”复合物脱色，从而在含有“碘—淀粉”的固体平板上形成透明圈。转化成功的酿酒酵母中含AMP^r基因的重组质粒拷贝数越多，透明圈越大。

（1）据图可知，目的基因的长度是________________bp；图中获取目的基因和切割质粒所用的限制性核酸内切酶分别是___________、__________，最终能形成重组质粒的原因是________________。
（2）图是四个成功导入重组质粒的酵母菌的菌株（品系），在“碘—淀粉”的固体平板上的生长情况，其中目的基因表达量最高的是________，根据题意，分析原因是_____________________。此“碘—淀粉”培养基从功能上看属于_____________培养基。

（3）图是不同温度条件下重组酿酒酵母菌株的木糖异构酶活性。据图推测，此酶最初来自于（_______）

A．嗜热细菌

B．大肠杆菌

C．葡萄球菌

D．乳酸杆

英国的科学家利用转基因技术培育出含有大鼠生长激素基因的巨型小鼠，如图是制备转基因小鼠的操作过程。图中编号表示过程，A～D表示限制酶，字母下方的斜线指向的是相应的酶切位点。

【小题1】图中过程① 需要用到的限制酶是___________ 和___________；过程②所用到的酶是___________。
【小题2】图中过程③ 所用方法是___________，受体细胞一般采用___________细胞。得到巨型小鼠后，可取其体细胞核，采用___________进行繁育。
【小题3】从转基因生物的安全性方面考虑，上述转基因小鼠研究必须在限定范围内进行，这一做法的目的是防止____________基因向其他生物扩散。