某植物蛋白酶抑制剂Ⅱ基因是重要的抗虫基因，该基因转录的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因，具体原理如下图所示，其中①〜③表示有关过程，Ⅰ〜Ⅲ表示有关物质。请回答下列问题：

（1）过程①反应体系中，需要加入__________种引物，还需加入__________酶，生成杂合链物质Ⅰ。
（2）利用DNA末段转移酶催化过程②，使cDNA单链左侧末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列（AAA(A)_n），其目的是_________________，进而利于过程③扩增获得目的基因序列Ⅲ，过程③反应体系需要添加的新引物序列是____________________。
（3）与物质Ⅲ相比，物质Ⅰ化学组成不同的是____________________。与过程③相比，过程①中碱某配对方式的不同之处是__________。
（4）在物质Ⅲ的两端通常还需要增加__________序列，以便与相应的载体重组，再利用__________处理大肠杆菌等，以利于将重组质粒导入细胞，构建cDNA文库。

科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程出Rubisco酶对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。下列叙述错误的是（   ）

A．PCR定点突变技术使Rubisco酶基因发生定向突变

B．PCR技术扩增目基因的过程中必须添加两种引物

C．PCR扩增过程需加入解旋酶和热稳定DNA聚合酶

D．PCR定点突变技术属于蛋白质工程的范畴

CAR-T细胞疗法是通过设计CAR基因，并导入癌症患者的T细胞中，使其转化为CAR-T细胞，CAR-T细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后，激活CAR-T细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆，主要过程如下图。请回答：

(1)过程①中，需要先要用____切割不同的DNA片段形成黏性末端，再利用____连接形成CAR基因。
(2)将CAR基因导入患者T细胞前，必须先完成过程②，一是因为CAR基因片段小，在细胞中容易丟失;二是因为缺少____，CAR基因在T细胞中不能复制。
(3)完成过程③常用方法是____。此外，还可以先将CAR基因整合到逆转录病毒载体中，再利用病毒的____性导入并将CAR基因整合到T细胞的____上。
(4)根据图示，CAR-T细胞对癌细胞的特异性杀伤主要取决于CAR蛋白____区。CAR-T细胞疗法具有持久性是因为CAR-T细胞能够在体内____。

萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。

（1）研究者用相同的________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。
（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。
①这是利用PCR技术实现了定点的________。
②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。

	引物A	引物B	引物C	引物D
PCR1
PCR2
PCR3
PCR4

 
________
（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是________________。

利用现代生物技术可对生物进行改造。例如：
①从某细菌中获取抗虫基因，并与质粒运载体拼接成重组DNA，导入棉花的愈伤组织细胞内，经培养、筛选和培育获得抗虫棉品种；
②将人胰岛素基因与质粒运载体才并接成重组DNA，再导入某种细菌细胞内，大量培养该种细菌，以生产医用的人胰岛素；
③取某种植物花粉，先组织培养形成完整桂林，再用秋水仙素处理，使之染色体加倍；
④将大鼠的生长激素基因与质粒运载体拼接成重组DNA，注射入小鼠的受精卵内，体外培养该受精卵使之发育到一定的胚胎阶段后，移植入代孕小鼠体内，产生“超级小鼠”； 
⑤取转基因抗冻番茄叶片经组织培养，产生再生植株，达到快速繁殖抗冻番茄的目的。根据上述材料回答问题。
【小题1】上述例子中，用到基因工程技术的有____________（填序号）。目的基因除了人工合成外，
还可通过________方法获取，拼接重组DNA的步骤中，都需要用到限制性内切酶和____________酶。
【小题2】与杂交的方法相比用例③中方法得到纯合子所需时间____________（较短/较长/相同）；用例⑤中所用方法大量去繁殖抗冻番茄时，抗冻基因____（更容易/不容易/一样容易）丢失。
【小题3】上述例子中，需要用到植物组织培养技术的有____________（填序号），植物组织培养技术的基本原理是植物活细胞具有______。