资料一：PCR（聚合酶链式反应）三个基本反应步骤是模板DNA在体外加热至95℃时解旋成单链，温度降至55℃左右，引物与模板单链按碱基互补配对的原则结合，再调至72℃左右时，DNA聚合酶沿5′→3′（磷酸到五碳糖）的方向延伸引物合成互补链。三个步骤完成一次称为一个循环。
资料二：图1显示了目的基因及其上限制酶切点，A、B、C、D是四种单链DNA片段；图2是质粒（显示限制酶切点和标记基因），一般来说，为了使切割后的目的基因与运载体结合，往往使用两种限制酶，同时还要破坏载体上的一个标记基因。根据资料回答下列问题：

（1）若利用PCR技术增加目的基因的数量，所用的酶是__________。由图1可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取__________作为引物，该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生DNA片段__________个。
（2）为了提高目的基因和质粒的重组成功率，同时有利于受体细胞的筛选，应该选择的限制酶是________。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切割且每次机会相等，则形成的含有完整抗四环素基因的DNA片段有__________种。
（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是__________。
（4）对基因组文库的描述，不正确的是__________。

A．含有某种生物的全部基因	B．基因中含有启动子和内含子
C．文库的基因是通过受体菌承载的	D．文库中的全部基因可以在物种间交流

CAR-T细胞疗法是通过设计CAR基因，并导入癌症患者的T细胞中，使其转化为CAR-T细胞，CAR-T细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后，激活CAR-T细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆，主要过程如下图。请回答：

(1)过程①中，需要先要用____切割不同的DNA片段形成黏性末端，再利用____连接形成CAR基因。
(2)将CAR基因导入患者T细胞前，必须先完成过程②，一是因为CAR基因片段小，在细胞中容易丟失;二是因为缺少____，CAR基因在T细胞中不能复制。
(3)完成过程③常用方法是____。此外，还可以先将CAR基因整合到逆转录病毒载体中，再利用病毒的____性导入并将CAR基因整合到T细胞的____上。
(4)根据图示，CAR-T细胞对癌细胞的特异性杀伤主要取决于CAR蛋白____区。CAR-T细胞疗法具有持久性是因为CAR-T细胞能够在体内____。

下图为转基因抗冻番茄培育过程的示意图。（其中amp^r为抗氨苄青霉素基因）下列叙述正确的是

A．可同时选用限制酶PstI、Sma I对含目的基因的DNA进行切割

B．过程②中，可直接将过程①得到的产物注入受体细胞

C．过程③需要用到纤维素酶和果胶酶，以便获得并培养活的原生质体

D．过程④中，若利用探针在试管苗细胞内检测到目的基因，则转基因成功

人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）

回答下列问题：
（1）己知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为____。
（2）若t-PA改良基因的粘性末端如图所示，那么需选用限制酶____和____切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接，在连接时需要用到___酶。
（3）应选择____（能／不能）在加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，目的是____。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈____色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
（4）以上制造性能优异的改良t-PA蛋白的过程称为____工程。

科学家将绿色荧光蛋白(GFP)基因转入小鼠胚胎干细胞(ES)内，GFP基因若表达就会使细胞带有绿色荧光，继而利用带有绿色荧光的ES细胞培育出嵌合型的小鼠用于科学研究，流程如图所示。请回答：

(1)在步骤①中构建基因表达载体时，需要在GFP基因的首端加入____________酶识别和结合的部位，有了它才能驱动GFP基因转录出mRNA，最终获得GFP。GFP基因的尾端还需有_________，使转录在需要的地方停止下来。
(2)步骤②的受体细胞是小鼠ES细胞，ES细胞一般从囊胚的___________分离得到，且ES细胞在形态上表现为________________的特点。在培养ES细胞时，细胞充满培养皿底部后停止分裂，这种现象称为__________________。如果想继续培养则需要重新用__________处理，然后分瓶继续培养，这样的培养过程通常被称为____________________培养。
(3)图中重组囊胚在步骤⑤之前要先检测是否有绿色荧光细胞，再通过___________技术移入代孕母鼠子宫内继续发育。