科学家将绿色荧光蛋白(GFP)基因转入小鼠胚胎干细胞(ES)内，GFP基因若表达就会使细胞带有绿色荧光，继而利用带有绿色荧光的ES细胞培育出嵌合型的小鼠用于科学研究，流程如图所示。请回答：

(1)在步骤①中构建基因表达载体时，需要在GFP基因的首端加入____________酶识别和结合的部位，有了它才能驱动GFP基因转录出mRNA，最终获得GFP。GFP基因的尾端还需有_________，使转录在需要的地方停止下来。
(2)步骤②的受体细胞是小鼠ES细胞，ES细胞一般从囊胚的___________分离得到，且ES细胞在形态上表现为________________的特点。在培养ES细胞时，细胞充满培养皿底部后停止分裂，这种现象称为__________________。如果想继续培养则需要重新用__________处理，然后分瓶继续培养，这样的培养过程通常被称为____________________培养。
(3)图中重组囊胚在步骤⑤之前要先检测是否有绿色荧光细胞，再通过___________技术移入代孕母鼠子宫内继续发育。

常见的酿酒酵母能利用葡萄糖，不能利用木糖发酵。若用转基因技术将发酵木糖的关键基因——木糖还原酶（XYL1）或木糖异构酶基因（XYLA）转入酿酒酵母中，均能培育出能利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母。图表示XYL1基因与细菌pYMILP质粒重组的过程示意图。图中AMP^r是氨苄青霉素抗性基因，其基因产物可使“碘—淀粉”复合物脱色，从而在含有“碘—淀粉”的固体平板上形成透明圈。转化成功的酿酒酵母中含AMP^r基因的重组质粒拷贝数越多，透明圈越大。

（1）据图可知，目的基因的长度是________________bp；图中获取目的基因和切割质粒所用的限制性核酸内切酶分别是___________、__________，最终能形成重组质粒的原因是________________。
（2）图是四个成功导入重组质粒的酵母菌的菌株（品系），在“碘—淀粉”的固体平板上的生长情况，其中目的基因表达量最高的是________，根据题意，分析原因是_____________________。此“碘—淀粉”培养基从功能上看属于_____________培养基。

（3）图是不同温度条件下重组酿酒酵母菌株的木糖异构酶活性。据图推测，此酶最初来自于（_______）

A．嗜热细菌

B．大肠杆菌

C．葡萄球菌

D．乳酸杆

CAR-T细胞疗法是通过设计CAR基因，并导入癌症患者的T细胞中，使其转化为CAR-T细胞，CAR-T细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后，激活CAR-T细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆，主要过程如下图。请回答：

(1)过程①中，需要先要用____切割不同的DNA片段形成黏性末端，再利用____连接形成CAR基因。
(2)将CAR基因导入患者T细胞前，必须先完成过程②，一是因为CAR基因片段小，在细胞中容易丟失;二是因为缺少____，CAR基因在T细胞中不能复制。
(3)完成过程③常用方法是____。此外，还可以先将CAR基因整合到逆转录病毒载体中，再利用病毒的____性导入并将CAR基因整合到T细胞的____上。
(4)根据图示，CAR-T细胞对癌细胞的特异性杀伤主要取决于CAR蛋白____区。CAR-T细胞疗法具有持久性是因为CAR-T细胞能够在体内____。

研究人员将鱼的抗冻基因导入番茄体内，获得抗冻能力明显提高的番茄新品种。下列操作合理的是

A．设计相应DNA单链片段作为引物，利用PCR技术扩增目的基因

B．利用限制性核酸内切酶和DNA聚合酶构建基因表达载体

C．将基因表达载体导入番茄体细胞之前需用Ca2+处理细胞

D．运用DNA分子杂交技术检测抗冻基因是否在番茄细胞中表达

下列关于基因工程的叙述，错误的是

A．cDNA文库中的基因可以进行物种间的基因交流

B．转基因棉花是否具抗虫特性可通过检测棉花对某种害虫的抗性来确定

C．外源DNA必须位于重组质粒的起始密码和终止密码之间才能进行表达

D．抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物，从而造成基因污染