Ⅰ.图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示质粒，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示目的基因及限制酶切点。请回答下列问题：

（1）图1中限制酶EcoRⅠ的特点是_____。
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是_____。
A．解旋酶作用于①处，DNA连接酶作用于②处
B．③和④相间排列，构成了DNA分子的基本骨架
C．③代表磷酸，④代表脱氧核苷酸
D．用该片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有4³种
（3）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是_____。
（4）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含_____基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。
Ⅱ.酶工程包括酶的生产、酶的分离纯化、酶的固定化和酶的应用。
（5）生产提纯分泌型脂肪酶工程中，加入硫酸铵使酶与其他杂质分离，该过程属于酶分离提纯步骤中的_____。
A．过滤酶 B．干燥酶 C．层析酶 D．沉淀酶
（6）因固化条件不同，会造成固化酶的活力（注：酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量）受到使用次数的影响，由图5信息，你对该固化酶的使用，给予指导性的意见是_____。

水稻是我国最重要的粮食作物。稻瘟病是由稻瘟病菌（Mp）侵染水稻引起的病害，严重危害我国粮食生产安全。与使用农药相比，抗稻瘟病基因的利用是控制稻瘟病更加有效、安全和经济的措施。现有甲（R₁R₁r₂r₂r₃r₃）、乙（r₁r₁R₂R₂r₃r₃）、丙（r₁r₁r₂r₂R₃R₃）三个水稻抗病品种，抗病（R）对感病（r）为显性，三对抗病基因位于不同染色体上。根据基因的 DNA 序列设计特异性引物，用 PCR 方法可将样本中的 R₁、r₁、R₂、r₂、R₃、r₃ 区分开。这种方法可用于抗病品种选育中基因型的鉴定。并且研究发现，水稻的抗病表现不仅需要自身抗病基因（R₁、R₂、R₃等）编码的蛋白，也需要 Mp 基因（A₁、A₂、A₃等）编码的蛋白。只有 R 蛋白与相应的 A 蛋白结合，抗病反应才能被激活。

用甲品种与感病品种杂交后，对F₂不同植株的 R₁、r₁进行 PCR 扩增。已知 R₁比r₁ 片段短。如下为扩增结果。请分析选项中正确的是：

A．水稻种植区的 Mp 是由不同基因型组成的群体。大面积连续种植某个含不同抗病基因的水稻品种，将会引起 Mp 种群基因频率改变，使该品种抗病性逐渐减弱直至丧失，无法在生产中继续使用

B．为了在较短时间内将甲、乙、丙三个品种中的抗病基因整合，选育新的纯合抗病植株，育种步骤的正确排序是先将甲×乙，得到F1R1r1R2r2r3r3植株×丙，得到不同基因型的子代，再用 PCR 方法选出 R1R1R2R2R3R3植株

C．若基因型为 R1R1r2r2R3R3和 r1r1R2R2R3R3的水稻，被基因型为 a1a1A2A2a3a3的 Mp侵染，推测这两种水稻的抗病性表现依次为抗病、感病

D．研究人员每年用 Mp（A1A1a2a2a3a3）人工接种水稻品种甲（R1R1r2r2r3r3），几年后甲品种丧失了抗病性，检测水稻的基因未发现变异。推测甲品种抗病性丧失的原因是 Mp 的A1基因发生了突变。

科研人员利用大肠杆菌构建了抗虫基因文库。最新研究发现漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有显著的杀虫效果，现以p-B质粒为载体，构建AH基因的cDNA文库。图1表示p-B质粒，其中Cm!r表示氯霉素抗性基因，ccdB 基因表达产物能抑制大肠杆菌DNA复制。图中箭头表示相关限制酶的酶切位点，且不同种限制酶识别序列不同，其中Aiu I、Xba I、Ssp I和Mfe I识别的碱基序列和酶切位点分别是AGLCT、T4CTAGA、AATIATT、 CIAATTG。请分析回答：

（1）为获得AH基因的cDNA，先要从漏斗蜘蛛毒素肽分泌细胞中提取_________，再利用反应体系中添加__________，从而准确合成出AH基因的cDNA，排除其他提取物的干扰。若从漏斗蜘蛛其他组织细胞提取，则难以成功，原因是其他组织细胞中_________。
（2）利用图中的质粒和AH基因构建重组质粒时，宜选用________双酶切质粒，再选用_________切割目的基因，将切割后获得的DNA片段混合，经DNA连接酶处理后，再与大肠杆菌混合培养，在含有适量氯霉素的培养基中添加适量冷冻的________，以促进转化。
（3）经上述处理培养后，获得存活的大肠杆菌中应含有的质粒是________，原因是_________。

下图是某转基因抗虫水稻培育流程图,下列有关分析错误的是(    )

A．④过程依据细胞的全能性原理

B．毒蛋白基因的获得需要RNA聚合酶

C．①过程所依据的理论基础之一是DNA分子结构的相似性

D．该基因工程成功的标志是毒蛋白基因在宿主细胞中稳定维持和表达其遗传特性

干扰素是一种重要的免疫物质，具有抗病毒、调节免疫等功效。研究人员利用基因工程通过培育山羊乳腺生物反应器大量生产β-干扰素。请回答下列问题：
（1）获取人β-干扰素基因常用的方法有两种，一种是从人的相应细胞中获取该基因的mRNA 逆转录合成___________，该过程需要的酶是____________。另一种是PCR技术，该技术的原理是________________，在PCR过程中，需用到______________酶。
（2）重组人β-干扰素基因表达载体由山羊β-酪蛋白基因启动子、人β-干扰素基因、标记基因和终止子等组成，其中___________________决定了人β-干扰素基因只能在山羊乳腺细胞中特异性表达，将该重组表达载体导入受体细胞一般采用______________________。
（3）一般需要将重组人β-干扰素基因表达载体导入___________________（填“雄性”或“雌性”）胚胎细胞中。在转基因羊发育成熟时，为了检测羊奶中是否有人β-干扰素，可用________________________方法。