乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白，免疫接种实验表明这两种蛋白质都可引起实验动物的免疫反应。科研人员用农杆菌转化法培育出转基因番茄，用于生产可口服的乙肝病毒疫苗，回答下列问题：

（1）T1蛋白和T2蛋白进入实验动物的肠道后，会被实验动物小肠黏膜上的一种M细胞当做_________处理，进而引发一系列的免疫反应，最终产生相应的_________________，使实验动物获得了对乙肝病毒的免疫能力。
（2）用转基因番茄生产可口服的乙肝病毒疫苗（含T1蛋白），所用的目的基因是____________，所用的运载体是土壤农杆菌的________________。
（3）可利用PCR技术扩增目的基因，其前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成_________。PCR一般要经历三十多次循环，目的基因在乙肝病毒DNA中的位置如图所示，则在____________（填“第一次”、“第二次”或“第三次”）次循环结束后，即可出现两条链等长的目的基因片断。 
（4）获得转基因番茄植株后，通过分子检测，已确定该植株所结番茄中含有T2蛋白，此后还需要进行个体生物学水平的鉴定，例如___________________________________。

PCR技术成为分子生物学实验室的一种常规手段，其原理是DNA半保留复制。
（一）在试管中进行DNA的人工复制（如下图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。

①PCR即___________________________，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。加热使DNA双链打开，这一步是打开________键，称为变性。
②当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，此过程中原料是脱氧核苷酸，遵循的原则是____________________________。
③若将一个用¹⁵N标记的DNA分子放入试管中，以¹⁴N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制4次以后，则¹⁵N标记的DNA分子占全部DNA总数的比例为________。若继续循环，该DNA片段共经过30次循环后需要________个引物。
④某样品DNA分子中共含5 000个碱基对，碱基数量满足：A+T/G+C＝2/3，若经4次循环，至少需要向试管中加入________个腺嘌呤脱氧核苷酸。(不考虑引物所对应的片段)
（二）下图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。

①图中实验材料A为洋葱。研磨前加入的B为洗涤剂和食盐，加入洗涤剂的目的是________________；加入食盐的目的是________________。
②通过上述所示步骤得到滤液C后，再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液，再过滤得到滤液D，向滤液D中加入蒸馏水的目的是________________。
③DNA鉴定的原理是____________________________________________。

下列有关PCR技术中引物的叙述，正确的是

A．引物是一小段DNA分子或双链RNA分子

B．扩增一个DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的DNA子链数目

C．两种引物之间能够发生碱基互补配对

D．DNA聚合酶只能从引物的5＇端连接脱氧核苷酸

双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）与脱氧核苷三磷酸（dNTP）的结构如图所示。已知ddNTP按碱基互补配对的方式加到正在复制的子链中后，子链的延伸立即终止。某同学要通过PCR技术获得被³²p标记且以碱基“C”为末端的、不同长度的子链DNA片段。在反应管中已经有单链模板、引物、DNA聚合酶和相应的缓冲液等，还需要加入下列哪些原料

①dGTP，dATP，dTTP，dCTP ②dGTP，dATP，dTTP
③α位³²p标记的ddCTP  ④γ位³²p标记的ddCTP

A．①③

B．①④

C．②③

D．②④

萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。

（1）研究者用相同的________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。
（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。
①这是利用PCR技术实现了定点的________。
②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。

	引物A	引物B	引物C	引物D
PCR1
PCR2
PCR3
PCR4

 
________
（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。
（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是________________。