研究发现，从锥形蜗牛体内提取出的锥形蜗牛毒蛋白（Con-Ins GI）能加速受体细胞信号转换，比人类胰岛素更加快速的发挥作用，因此制造这类“速效胰岛素”以及利用转基因技术实现批量生产为Ⅰ型号糖尿病治疗的新思路。
（1）利用基因工程制造速效胰岛素过程中，构建的基因表达载体一般包括目的基因、启动子、______、标记基因和复制原点，标记基因的作用是___________________________。
（2）为了获得目的基因，可以通过提取分析毒蛋白中的_________序列推知毒蛋白基因的核苷酸序列，再用DNA合成仪直接合成。基因工程中需要DNA连接酶，根据酶的不同分为两类，其中“缝合”双链DNA片段平末端的是______________________。
（3）将人工合成的目的基因导入大肠杆菌体内，一般先用_______处理大肠杆菌使之成为_________细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于_________中与该类细胞混合，在一定温度下促进细胞吸收DNA分子完成转化过程。
（4）经过目的基因的检测和表达，获得Con-Ins GI毒蛋白活性未能达到期待的“速效胰岛素”的生物活性，导致这种差异的原因可能是_______________________________________________________。

下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，不正确的是（   ）

A．①→②利用两种不同限制酶处理，能避免含抗虫基因的DNA片段自身环化

B．②→③可用氯化钙处理农杆菌，有助于促进重组Ti质粒转化到农杆菌细胞中

C．③→④用农杆菌侵染植物细胞，重组Ti质粒整合到植物细胞的染色体上

D．④→⑤用植物组织培养技术培养，利用了植物细胞的全能性

1978年，人类首次利用转基因技术生产出人胰岛素，其过程大致如图所示：

（1）人胰岛素由A、B两条肽链组成，可根据组成肽链的氨基酸序列，确定编码胰岛素基因的碱基序列，因此可通过____________方法获得目的基因。
（2）β- 半乳糖苷酶能将无色ONPG分解，产物呈黄色，本生产流程中β- 半乳糖苷酶基因作为___________，通过①和②，完成基因表达载体的构建，写出该过程处理DNA分子所需要的酶：________________________________。
（3）③表示将表达载体导入受体细胞，用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是使之变为____________细胞，利于外源DNA侵染，④表示利用化学方法催化二硫键的形成，合成具有生物活性的胰岛素，人体内该过程在胰岛B细胞的_________中进行。

研究人员用图1中质粒和图2中含目的基因的片段构建重组质粒（图中标注了相关限制酶切割位点），将重组质粒导入大肠杆菌后进行筛选及PCR鉴定。以下叙述不正确的是

A．构建重组质粒的过程应选用BclⅠ和HindⅢ两种限制酶

B．使用DNA连接酶将酶切后的质粒和目的基因片段进行重组

C．能在添加四环素的培养基上生存一定是含有重组质粒的大肠杆菌

D．利用PCR鉴定含目的基因的大肠杆菌时应选用引物甲和引物丙

在乙肝病毒（HBV）的结构蛋白中，与疫苗有关的主要是HBSAg蛋白，HBSAg基因已在不同的生物体系中成功表达。如图表示研究人员用农杆菌转化法培育出转基因番茄的过程，用于生产可口服的乙肝病毒疫苗，根据所学知识回答下列问题：

（1）可利用PCR技术扩增HBSAg基因片段，其前提是__________________，以便根据这一序列合成引物。扩增过程中应选择下图中的引物_________（填字母）与HBsAg基因片段结合。

（2）由上图可知，过程①用到的限制酶是_________，在培养农杆菌的培养基中添加__________可筛选得到含重组质粒的农杆菌。
（3）将含有HBSAg基因的农杆菌导入番茄细胞时，受损的番茄组织更有利于农杆菌的侵染，其原因是______________________________，HBSAg基因在番茄植株中遗传信息传递的一般规律为___________________（用流程图表示）。
（4）转基因番茄的细胞具有全能性，在一定的_____________以及无菌、适宜的pH和温度等条件下，可以形成愈伤组织，再进一步发育形成试管苗。过程④的实质是__________________。用该植株结出的番茄果实饲喂小鼠，若在小鼠的血清中检测到__________________，则说明转基因疫苗口服有效。