将某病毒的外壳蛋白（L1）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因连接，构建L-GFP融合基因，再将融合基因与质粒连接构建下图所示表达载体。图中限制酶E1~E4处理产生的黏性末端均不相同。下列叙述不正确的是（   ）

A．构建L1-GFP融合基因需要用到E1、E2、E4三种酶

B．E1、E4双酶切确保L1-GFP融合基因与载体的正确连接

C．GFP可用于检测受体细胞中目的基因是否表达

D．将表达载体转入乳腺细胞培育乳汁中含L1蛋白的转基因羊

人 t-PA 蛋白能高效溶解血纤维蛋白凝聚的血栓。用传统基因工程生产的t-PA给心梗患者大剂量注射却会诱发颅内出血，原因在于其与血纤维蛋白结合的特异性低，但若将其第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，就能显著降低出血副作用。据此，科学家对人t-PA 基因进行序列改造，再采取传统的基因工程方法表达该突变基因，制造出了高性能的t-PA 突变蛋白。

（1）人 t-PA 基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA。丝氨酸的密码子为UCU，突变基因中对应该氨基酸密码子的碱基序列应设计为______。
（2）上述获得突变目的基因的基本途径是___。
（3）如图所示 t-PA 突变基因、质粒，用__________限制酶切开该质粒较好。
（4）将相应的重组质粒导入大肠杆菌中，含 t-PA 突变基因的细胞应具有的性状是______。
（5）上述生物工程技术是以_______为基础的，首先通过________，再进行______，以满足医疗需求的。

为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与Ti质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。回答下列问题：

（1） PCR技术所用到的关键酶是__________，利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，其目的是__________。
（2）图1是花色基因C两侧被EcoR I酶切后所形成的末端结构，请写出EcoR I酶识别序列并标出切点：__________（用“↓”表示切点位置）。图2中EcoRI酶所识别的位点应在Ti质粒的__________片段上。
（3）将导人目的基因的菊花细胞培养成植株需要利用__________技术，其原理是__________。
（4）在个体生物学水平上，如何鉴定转基因菊花培育是否成功？____________________

据报道，科研人员已将POLLED基因的一个等位基因插入到奶牛胚胎成纤维细胞的基因组中。他们随后进行体细胞核移植：将这种经过基因改造的胚胎成纤维细胞移植到移除细胞核的奶牛卵母细胞中，使其重组并能发育为新的胚胎，并将形成的重组胚胎移植到代孕母奶牛子宫中，最终产下5只小牛，其中的两只小牛Spotigy和Buri仍然是活的，如今有10个月大。更重要的是，他们没有发现这些小牛存在角芽的证据。
（1）科研人员将POLLED基因的一个等位基因插入到奶牛胚胎成纤维细胞的基因组中的常用方法是___________________________。
（2）为了使POLLED基因的一个等位基因能够表达和发挥作用，就要进行__________的构建。在构建过程中，要用到的两种酶是_______________、__________________。
（3）从屠宰场收集奶牛卵巢，采集卵母细胞，在体外培养到___________________期。
（4）奶牛一般选取发育到______________阶段的重组胚胎进行移植。移植的胚胎能在代孕奶牛子宫内发育的免疫学基础是___________________________________________。
（5）中国荷斯坦牛为我国奶牛的主要品种，它的育种原理是_________________。它与该转基因奶牛的培育原理________（填“相同”或“不同”）。