受损伤的马铃薯细胞内酚氧化酶(PPO)和底物(酚类物质)直接接触,引起马铃薯的褐变,为探究温度对PPO活性的影响,实验小组进行如下实验:
(1)PPO粗提液的提取在________(填“低温”或“高温”)条件下将新鲜马铃薯用蒸馏水洗净、去皮,取20g样品放入含50mL磷酸缓冲液(pH值为5.5)的研钵中,同时加入少量石英砂,研磨、离心、上清液即为PPO的粗提液,加缓冲液研磨的目的是________
(2)不同温度下PPO活性的测定
步骤顺序
| 试管1
| 试管2
| 试管3
| 试管4
| 试管5
| 试管6
| 试管7
| 试管8
|
PPO粗提液
| 2mL
|
| 2mL
|
| 2mL
|
| 2mL
|
|
酚类底物
|
| 2mL
|
| 2mL
|
| 2mL
|
| 2mL
|
反应
| 混合振荡
| 混合振荡
| 混合振荡
| 混合振荡
|
温度预处理
| (5min)0℃
| 15℃
| 30℃
| 45℃
|
保温时间
| 5min
| 5min
| 5min
| 5min
|
记录结果
| +
| ++++
| ++++
| ++
|
(注:反应底物充足;实验结果中“+”越多褐色越深)
①实验步骤顺序有不妥之处,请改正________。
②实验结果表明:15℃和30℃温度条件,PPO具有相同的活性,从酶的特性分析其原因是________。
③为进一步探究PPO最适温度,应在________范围内设置温度梯度。
(3)I.在温度30℃的条件下,取等量提取液分别加到四支盛有等量过氧化氢溶液、pH分别为3、5、7、9的试管中,结果发现每一支试管都产生气体。请回答:
①该实验的课题是:________。
②各实验组均在30℃下进行的原因是:a________;b_______。
Ⅱ.将加入4支试管中的马铃薯提取液的量减半,重复实验I.分别测定实验I、Ⅱ中过氧化氢在相同时间内的含量变化,绘制成如图所示曲线,请回答:曲线A是实验________(选填I或Ⅱ)的结果。据图能否说明实验I、Ⅱ中酶活性不同?_______。
