一对表现型正常的夫妇，生了一个β地中海贫血症患儿．在他们欲生育第二胎时，发现妻子的双侧输卵管完全堵塞，不能完成体内受精．医生为该夫妇实施了体外受精和产前基因诊断，最终喜获一健康女婴．请回答：

（1）哺乳动物的体外受精主要包括____ 、____ 、____  等主要步骤．

（2）在对胎儿进行β地中海贫血症的产前基因诊断时，要先从羊水中的胎儿细胞提取DNA进行PCR扩增，然后用限制酶对扩增产物进行切割，产生多个片段的酶切产物，再根据不同长度的酶切产物在电泳时移动的速率不同，形成不同的电泳条带进行判断．

①PCR扩增与体内DNA复制过程中，解旋的方法不同，前者通过____解开双链，后者通过____解开双链．

②一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，大多数限制酶的识别序列由____ 个核苷酸组成．DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式，即黏性末端和平末端．当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是____．

③利用PCR扩增目的基因也是目的基因获取的方法之一，除此以外，目的基因还可以从基因文库中获取，基因文库包含____和____ 等类型，后者的基因中含有启动子．

④基因诊断的主要原理是____ ．