根据某基因上游和下游的碱基序列，设计合成了用于该基因PCR的两段引物（单链DNA）。引物与该基因变性DNA（单链DNA）结合为双链DNA的过程称为复性。如图是两引物的T_m（引物熔解温度，即50%的引物与其互补序列形成双链DNA分子时的温度）测定结果，下列叙述正确的是（   ）

A．通常引物1和引物2不能有碱基互补配对关系

B．两引物分别是子链延伸的起点，并可以反复利用

C．若两引物的脱氧核苷酸数相同，推测引物2的G—C含量较高

D．复性所需温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度等因素

水稻是我国最重要的粮食作物。稻瘟病是由稻瘟病菌（Mp）侵染水稻引起的病害，严重危害我国粮食生产安全。与使用农药相比，抗稻瘟病基因的利用是控制稻瘟病更加有效、安全和经济的措施。现有甲（R₁R₁r₂r₂r₃r₃）、乙（r₁r₁R₂R₂r₃r₃）、丙（r₁r₁r₂r₂R₃R₃）三个水稻抗病品种，抗病（R）对感病（r）为显性，三对抗病基因位于不同染色体上。根据基因的 DNA 序列设计特异性引物，用 PCR 方法可将样本中的 R₁、r₁、R₂、r₂、R₃、r₃ 区分开。这种方法可用于抗病品种选育中基因型的鉴定。并且研究发现，水稻的抗病表现不仅需要自身抗病基因（R₁、R₂、R₃等）编码的蛋白，也需要 Mp 基因（A₁、A₂、A₃等）编码的蛋白。只有 R 蛋白与相应的 A 蛋白结合，抗病反应才能被激活。

用甲品种与感病品种杂交后，对F₂不同植株的 R₁、r₁进行 PCR 扩增。已知 R₁比r₁ 片段短。如下为扩增结果。请分析选项中正确的是：

A．水稻种植区的 Mp 是由不同基因型组成的群体。大面积连续种植某个含不同抗病基因的水稻品种，将会引起 Mp 种群基因频率改变，使该品种抗病性逐渐减弱直至丧失，无法在生产中继续使用

B．为了在较短时间内将甲、乙、丙三个品种中的抗病基因整合，选育新的纯合抗病植株，育种步骤的正确排序是先将甲×乙，得到F1R1r1R2r2r3r3植株×丙，得到不同基因型的子代，再用 PCR 方法选出 R1R1R2R2R3R3植株

C．若基因型为 R1R1r2r2R3R3和 r1r1R2R2R3R3的水稻，被基因型为 a1a1A2A2a3a3的 Mp侵染，推测这两种水稻的抗病性表现依次为抗病、感病

D．研究人员每年用 Mp（A1A1a2a2a3a3）人工接种水稻品种甲（R1R1r2r2r3r3），几年后甲品种丧失了抗病性，检测水稻的基因未发现变异。推测甲品种抗病性丧失的原因是 Mp 的A1基因发生了突变。

用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液（Marker），10号为蒸馏水。PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出分析不合理的是

A．PCR产物的分子大小在250至500bp之间

B．3号样品为不含目的基因的载体DNA

C．9号样品对应植株不是所需的转基因植株

D．10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰

双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）与脱氧核苷三磷酸（dNTP）的结构如图所示。已知ddNTP按碱基互补配对的方式加到正在复制的子链中后，子链的延伸立即终止。某同学要通过PCR技术获得被³²p标记且以碱基“C”为末端的、不同长度的子链DNA片段。在反应管中已经有单链模板、引物、DNA聚合酶和相应的缓冲液等，还需要加入下列哪些原料

①dGTP，dATP，dTTP，dCTP ②dGTP，dATP，dTTP
③α位³²p标记的ddCTP  ④γ位³²p标记的ddCTP

A．①③

B．①④

C．②③

D．②④

某植物蛋白酶抑制剂Ⅱ基因是重要的抗虫基因，该基因转录的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因，具体原理如下图所示，其中①〜③表示有关过程，Ⅰ〜Ⅲ表示有关物质。请回答下列问题：

（1）过程①反应体系中，需要加入__________种引物，还需加入__________酶，生成杂合链物质Ⅰ。
（2）利用DNA末段转移酶催化过程②，使cDNA单链左侧末端增加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列（AAA(A)_n），其目的是_________________，进而利于过程③扩增获得目的基因序列Ⅲ，过程③反应体系需要添加的新引物序列是____________________。
（3）与物质Ⅲ相比，物质Ⅰ化学组成不同的是____________________。与过程③相比，过程①中碱某配对方式的不同之处是__________。
（4）在物质Ⅲ的两端通常还需要增加__________序列，以便与相应的载体重组，再利用__________处理大肠杆菌等，以利于将重组质粒导入细胞，构建cDNA文库。